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蛋白Marker是蛋白分子量标准,是一些已知分子量的蛋白质的混合物,像“尺子"一样用来指示蛋白质条带的大小。Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,因此选择正确的蛋白Marker也是WB实验成功的必要条件之一。那么你知道蛋白Marker有哪些分类吗?
总体来说目比较常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker和预染蛋白Marker。
非预染蛋白Marker是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液,方便不同大小的蛋白进行比较。非预染的Marker使用上不如预染Marker好用,因为电泳过程中看不到,电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用,无法在实验过程中起预示参照作用,属于“后知后觉"型的。但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以比较准确,可以精确判断蛋白大小。
预染蛋白Marker是纯化好的一些蛋白,通过与染料共价耦联后混合在一起,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。
预染蛋白Marker的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入最佳分辨区时停止电泳以得到最佳分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;还可以在膜上标记蛋白分子量,所以吸引了许多实验室人员选择预染蛋白标准。
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