吸光度对ELISA试剂盒实验的影响

ELISA试剂盒以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，*较呈直线的部分是的检测区域。
因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
测定大分子量物质的夹心法ELISA试剂盒，标准曲线的范围一般较宽，曲线zui高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标。
酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。
如有细菌污染，菌体中能够富含内源性HRP，有国内报导酶免HAg试剂检测溶血标本时可构成假阳性。如在冰箱中保管过久，其间的IgG可发作聚合，在直接法ELISA试剂盒中可使本底加深。
内源性烦扰物：类风湿因子(RF)、黄疸等，类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的本身抗体，大都为IgM类，能充任抗原成分与固相及酶标抗体反响，然后出现非特异性显色。 
黄疸血标本中常富含内源性过氧化物酶，如用辣根过氧化物酶为符号物，就有能够发作非特异性显色。 
血标本在收集处置时应留心，在冰箱中保管不易过久。
ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将*标记的抗体同时温育。洗涤后，ELISA试剂盒加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
影响ELISA试剂盒中非特异性显色的缘由许多，如试剂盒特异性、查验标本中含酶符号物的烦扰物，操作进程中的疑问。
外源性烦扰物，常常因样品收集、储存、处置不妥构成如样品溶血，被细菌污染，标本凝聚不全等。
溶血标本，红细胞溶解割裂，释放出血红素构成，而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本能够会添加非特异性显色。
ELISA试剂盒颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。ELSIA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致.
有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。
ELISA试剂盒底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。