ELISA实验中的重要因素:温育

温育是ELISA测定中影响测定胜败zui为要害的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的反响在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*，必须在必定的温度条件下反响必定的时刻。温育所需时刻与温度成反比，即温度越高，则所需时刻相对较短。zui为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。

温育这一步是实验ELISA测定中zui简单出现疑问的过程。一般目前国内ELISA产品试剂盒的反响温育时刻为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则一般为37℃ 1～2小时才干有较*的，低于1小时，也许会影响测定下限。因而，对于温育，在实践测定操作中必定要留意以下几点：
要确保在设定的温度下有满足的反响时刻。一般来说，加完样本和/或反响试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需求必定的时刻，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时刻也许还比较长，而在临床实验室中，很少有人留意这个疑问，一般是将微孔板一放入温箱即开始 计时，这样就很简单形成实践测定中温育时刻不行，弱阳性样本测不出来的疑问。

曾有一地处南边的血站同行提出了一个疑问，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时刻，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床查验中心供给的1 ng/ml弱阳性样本时，老是测不出来，不知原因为何？这也许就与南边冬季室内温度较低有关，此刻微孔板转入温箱后37℃温育时刻不行，致使弱阳性样本测定为阴性。因而，为确保37℃下满足的温育时刻，临床实验室可自行确定本实验室不一样时节（不一样室温下）微孔板从室温拿至温箱后需求多长时刻孔内温度才干到达37℃，从而恰当延伸板条在温箱中的放置时刻。详细的做法是，用一小温度计放置板孔反响溶液中丈量调查即可。