干细胞周期测定实验的用途

一、要求
1、熟悉干细胞周期的基本概念、原理，掌握实验操作的流程和方法。
2、观察流式细胞仪检测、分析细胞周期的各种峰形图的意义。
3、了解细胞周期测定实验的用途。
二、原理
细胞周期是指从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束所经历的时间。细胞周期反映了细胞的增殖速度，周期越短说明细胞的增殖速度越快。测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法和流式细胞仪测定法等。流式细胞仪测定法是利用溴化乙锭（PI）渗入测定细胞周期的方法。溴化乙锭加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含溴化乙锭的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
三、材料
1、秋水仙素。
2、溴化乙锭（1.0mg/ml）。
3、无水乙醇。
4、RPMI1640*培养基。
5、RNase A (1mg/mL)。
6、PBS。
7、6孔细胞培养板。
8、离心机。
9、流式细胞仪。
10、细胞培养箱。
四、方法
1、取1×106对数生长期的细胞接种于6孔板，调整好细胞生长状态。
2、离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗涤两次。
3、加入预冷70％乙醇0.5ml，于4℃固定30分钟。
4、离心收集细胞，取1mL PBS洗涤一次，加入0.2ml反应液(含50靏/mL溴化乙锭，100靏/mL RNase A和0.2% Triton X-100 的PBS)，4℃避光孵育30分钟。
5、PBS洗涤两次，用流式细胞仪检测分析。
五、干细胞注意事项
1、实验操作过程中动作要尽量轻柔，不可用力打碎细胞。
2、RNA酶现加，以*去除细胞中RNA的干扰。
3、溴化乙锭是光敏物质，操作过程中注意避光。
4、zui后一步的洗涤应尽量弃净上清，以免游离PI残留影响实验结果。
17429-69-5    Astragaloside    20mg/支    黄芪总皂苷
84687-43-4    Astragaloside IV    20mg/支    黄芪甲苷
84680-75-1    Astragaloside I    10mg/支    黄芪皂苷I
84676-89-1    Astragaloside II    10mg/支    黄芪皂苷II
84687-42-3    Astragaloside III    10mg/支    黄芪皂苷III
97-53-0    Eugenol    0.5ml/支    *
860-79-7    Cyclovirobuxine    20mg/支    黄杨碱
10338-51-9    Salidroside    20mg/支    红景天苷
干细胞
84954-93-8    Rosarin    20mg/支    络塞琳
84954-92-7    Rosavin    20mg/支    络塞维
85026-55-7    Rosin    20mg/支    络缌
100462-37-1    Rosiridin    20mg/支    络塞定