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人源细胞培养操作规程

来源:上海莼试生物技术有限公司   2018年04月12日 14:46  

人源细胞处于未分化状态:ES细胞培养用含有ESGRO(白血病抑制因子)的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1%明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2-3天从达到80%-90%融合的平板按1:8的比率传代细胞一次,细胞传代以后,在将细胞接种在0.1%明胶包被的培养皿之前,通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时,使分化细胞粘附,从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃,5%CO2,100%湿度条件下培养。
培养基:ES:配制一20×不含DMEM,HS,ESGRO的溶液(该溶液也能用于EB培养基--见下文)。分装在50ml FALCON管中,(稀释为2×,每管42ml),贮存在-20℃。通过将21ml该溶液,HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基,0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。
注:一瓶DMEM是500ml。
贮存液:DMEM(高糖)、马血清(HS)、L-*(200mM)、MEM NEAA(10mM)、HEPES(1M)、β-巯基乙醇(55Mm)、PEST、ESGRO。

复苏细胞:细胞被冻存在10%二甲基亚砜(DMSO)中防止结晶的形成,结晶的形成会损害细胞。然而,二甲基亚砜对细胞有毒性,快速的进行细胞复苏是很重要的。
操作步骤:
1.从液氮中取出一管细胞;
2.将冻存管置于37℃水浴中2分钟(或放到管内溶液恰好*溶解);
3.将细胞转移到一15ml Falcon管中;
4.加入5ml ES培养基(用培养基冲洗冻存管);
5.离心3分钟;
6.弃上清,用2ml ES培养基重悬细胞,至少吹打10次;
7.接种在明胶包被(见下文)的6孔或6cm组织培养皿;
8.孵育。
冻存细胞
人源细胞冻存液:90%HS和10%二甲基亚砜
步骤:
1.1×PBS洗细胞并留少许PBS在培养皿内;
2.用细胞刀收集细胞;
3.将细胞转入15ml Falcon管内并离心3分钟;
4.弃去上清并将细胞重悬于冷的冻存液中(10cm的培养皿用2ml,15cm的培养皿用6-7ml。)
5.分装于冻存管内,每管1ml;
6.置-80℃过第二天移入液氮。
"分子式: C27H30O15 
分子量:594.52 "    Oroxin B    20mg/支    木蝴蝶苷B
94079-81-9    Poliumoside    20mg/支    金石蚕苷
"分子式:C34H44O19 
分子量:756.70 "    Forsythoside B    20mg/支    连翘酯苷B
1957/10/3    Palmitic acid    20mg/支    棕榈酸
104112-82-5    Phellodendrine chloride    10mg/支    盐酸黄柏碱
2141/9/5    Magnoflorine iodide    10mg/支    碘化木兰花碱
136997-64-3    (-)-Syringaresnol-4-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside    10mg/支    (-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷
110703-200726    含量测定    20mg    人参皂苷Rgl
人源细胞

 

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