芦荟是一种多年生百合科芦荟属肉质的草本 植物,起源于南非,作为天然药用植物,芦荟 已有几千年的药用历史,在我国古代医书《神农本 草经》、《本草纲目》、《本草拾遗》中均记载着芦荟 特殊的药用功效,在《辞海》中也有相关记载: “芦荟,主产于热带非洲,中国云南元江有野生”。 在日本,人们把芦荟称之为“不需要大夫”(医者いらず),被誉为世界标准药典的《英国药典》对 其也有入药记载 。
库拉索芦荟凝胶冻干粉(批号 ,云南万绿生物股份有限公司)、*、透明质 酸钠(Bomei,相对分子质量在 0.8 × 106 ~ 2.0 × 106 )、透明质酸酶(上海源叶生物科技有限公司, 300 ~ 500 U/mg)、醋酸钠(NaC2H3O3•3H2O)、角质 形成细胞培养液(第四军医大学组织工程中心)、 PBS(博士德)、MTT(Sigma)、 DMSO(Sigma)、 Human IL - 1α ELISA KIT(博士德)、Human IL - 8 ELISA KIT(Abcam)。冰醋酸、氯化钠、十六烷基 基*(CTAB),均为国产分析纯。
紫外 - 可见分光光度计(Thermo)、CO2 培养 箱(Thermo)、超净工作台(苏净安泰)、倒置显微 镜(Olympus)、微量振荡器(其林贝尔)、酶标仪 (BioTek)、恒温箱(泰斯特)。
1.1.3 测试系统
细胞实验所用细胞为角质形成细胞,由广东 博溪生物科技有限公司通过细胞原代、传代培养获得。
透明质酸酶能将大分子的透明质酸水解成低 分子化合物,未水解的透明质酸会与十六烷基 基*(CTAB)形成不溶物,而水解后的低分子 化合物不会。通过测定 405 nm 处的浊度值,可以 反映透明质酸酶的活性。 实验设置:将库拉索芦荟凝胶粉按照 16.5、 33、82.5 和 165 mg/mL 的质量浓度进行分组,每 个实验分组按表 1 进行操作。
实验方案:库拉索芦荟凝胶粉样品检测设置 8 个浓度梯度,每个浓度梯度下设置 3 个重复孔,同 时,实验设置溶剂对照孔、调零孔(角质形成细胞 培养液)和阳性对照孔(PC, 40 mg/mL DMSO)。 通过 MTT 细胞活性检测方法,筛选下一步实验中 细胞给药的安全浓度。
数据经过 SPSS 12.0 统计软件做多组间单因 素方差分析,以 P<0.05 为差异有统计学意义,由 于测试平台特性,数据存在波动性,SD 值控制在 10% 以内。通过测试,库拉索芦荟凝胶粉在 16.5 ~ 165 mg/mL 范围内对透明质酸酶抑制率分别为 13.10% ~ 82.14%(P<0.05),低浓度下比对照品甘 草酸二钾效果稍弱,但在 165 mg/mL 的高浓度下, 可以达到与 0.5 mg/mL *接近的效果,本 次测试的结果表明,库拉索芦荟凝胶粉测试样具有 较好的透明质酸酶活性抑制作用,且在一定浓度范 围内,抑制率与添加量呈正相关,与 0.5 mg/mL 甘 草酸二钾的抑制趋势和效果接近。根据 MTT 实验结果可以看出:与溶剂对照相 比,当芦荟凝胶粉浓度为 250 mg/L 时,细胞的相 对活力值为 91.40%,且无细胞毒性(注:选取细胞 相对活力值大于 90% 的转折点浓度作为安全 给药浓度)。根据形态学结果可以看出:样品库拉索芦荟凝 胶粉质量浓度为 250 mg/L 时,细胞边缘轮廓清晰, 形态规则,胞内无明显颗粒物,与溶剂对照组细胞 状态无明显差异。故根据 MTT 结果和形态学结 果,最终确定样品库拉索芦荟凝胶粉在角质形成细 胞上的安全给药浓度为 250 mg/L。
芦荟作为一种具有漫长种植史的草本植物,在 很多地方被当地人用于保湿和修复方面的药材,而 对于芦荟含有的成分修复作用的研究也很多, 但大多是基于芦荟大黄素等蒽醌类物质的功效研 究,对芦荟凝胶的修复功效研究还较少。 透明质酸酶是一类在动物组织和微生物中广 泛存在的酶,它通过断开透明质酸(HA)糖链中的 N - 乙酰氨基葡糖和 D - 葡糖醛酸之间的糖苷键, 将其解聚和水解成小分子的 HA 或寡糖,HA 的代 谢对于皮肤的保湿、微观炎症和损伤的修复都有着 重要的作用,透明质酸酶调节 HA 代谢的作用在生 理活动中也越来越受到重视,活性成分对透明 质酸酶的抑制,与其保湿、晒后修复等功效都有着 重要的关联。 紫外线损伤,又称光老化,是由于皮肤在紫外线,特别是 UVB 的照射下,局部出现的红斑、角质 层破坏等微观损伤,也是皮肤众多微观炎症和损伤 中较为常见的微观损伤。
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