1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。
小鼠髓过氧化物酶(mouse MPO)
小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)
小鼠肌肉生成抑制素(mouse Myostatin)
小鼠巨噬细胞游走抑制因子(mouse MIF)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-1(mouse MIP-1)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-2(mouse MIP-2)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-3a(mouse MIP-3a)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-3β(mouse MIP-3β)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-1a(mouse MIP-1a/CCL3)
小鼠基质金属蛋白酶-1(mouse MMP-1)
小鼠基质金属蛋白酶-2(mouse MMP-2)
小鼠基质金属蛋白酶-3(mouse MMP-3)
小鼠基质金属蛋白酶-9(mouse MMP-9)
小鼠核转录因子(mouse NF-kB )
小鼠核转录因子p65(mouse NF-kBp65)
小鼠硝基酪氨酸(mouse Nitrotyrosine)
小鼠神经肽Y(mouse NPY)
小鼠神经生长因子(mouse NGF)
小鼠神经营养素3(mouse NT-3)
小鼠神经营养素4(mouse NT-4)
小鼠一氧化氮(mouse NO)
小鼠骨保护素(mouse OPG)
小鼠骨桥素(mouse OPN)
小鼠骨钙素(mouse Osteocalcin)
小鼠8-羟基脱氧8-OHdG鸟苷酸(mouse 8-OHdG)
小鼠食欲素A(mouse Orexin A)
小鼠氧化低密度脂蛋白(mouse OxLDL)
小鼠抑瘤素mouse Oncostatin M(mouse OSM)
小鼠催产素(mouse Oxytocin)
小鼠骨保护素配体(mouse OPGL)
小鼠血小板活化因子(mouse PAF)
小鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(mouse PAP)
小鼠血小板相关抗体IgG(mouse PAIgG)
小鼠增殖细胞核抗原(mouse PCNA)
小鼠纤溶酶原激活剂抑制物-1(mouse PAI-1)
小鼠血小板生长因子(mouse PDGF)
小鼠血小板源生长因子-BB(mouse PDGF-BB)
小鼠血小板生长因子受体α(mouse PDGF sRα)
小鼠可溶程序性死亡因子(mouse sPD-1)
小鼠6-酮-前列腺素F1a(mouse 6-k-PGF1a)
小鼠前列腺素E2(mouse PGE2)
小鼠磷脂酶A2(mouse sPLA2)
小鼠Pleiotrophin(mouse Pleiotrophin)
小鼠P53蛋白(mouse P53)
小鼠趋化因子(mouse RANTES)
小鼠抵抗素(mouse Resistin)
小鼠可溶性破骨细胞异化因子(mouse sRANKL)
小鼠血清淀粉样蛋白(mouse SAA)
小鼠S-100蛋白(mouse S-100)
小鼠性激素结合球蛋白(mouse SHBG)
小鼠超氧化物歧化酶(mouse SOD)
小鼠生长抑素(mouse Somatostatin)
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