紫外分析仪检测食品中的黄曲霉**

欢迎联系我

有什么可以帮您？在线咨询

紫外分析仪检测食品中的黄曲霉**

来源：上海嘉鹏科技有限公司 2022年05月04日 09:04

ICS 67.050
X 04
中华人民共和标准
GB/T 18979-2003
食品中黄曲霉**的测定
**亲和层析净化效液相色谱法
和荧光光度法
De te r m in at io n a fla to xins content
Cleanup by immunoaffinity chromatogaphy
in foodand
determination by
high-performance liquid chromatigraphy and fluorometer
2003-02-21发布2003-08-01实施
雄宙嘉 k Wi A * 1 M 发布
GB/T 18979-2003
月明青
本标准由北京市提出。
本标准由全食品工业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:北京市产品质量监督检验所、青岛出人境检验、标准物质研究中心。
本标准主要起草人:晶、张鹏、张艺兵、邵明武。
本标准为次发布。
GB/T 18979-2003
食品中黄曲霉**的测定
**亲和层析净化效液相色谱法
和荧光光度法
范围
本标准规定了**亲和层析净化效液相色谱法和**亲和层析净化荧光光度法测定食品中
黄曲霉**的条件和详细分析步骤。
本标准适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食
品中黄曲霉**的测定。
样品中黄曲霉**的检出限:**亲和层析净化效液相色谱法测定黄曲霉**B;以及黄曲霉
**B,,玖,G,,G 。总量检出限为 1k g/kg。**亲和层析净化荧光光度法测定黄曲霉**B氏、
G,,G 总量检出限为 1m g/kg,酱油样品中检出限为2.5 p g/kg.
2 **亲和层析净化效液相色谱法
2.1 方法提要
试样经过甲醇水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉**特异抗体的**亲和层析
净化，此抗体对黄曲霉**BBz,GG:具有专性，黄曲霉**交联在层析介质中的抗体上。用水
或吐温-20/PBS将**亲和柱上杂质除去，以甲醇通过**亲和层析柱洗脱，洗脱液通过带荧光检测器
的效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉**的含量。
2.2 试剂和溶液
除非另有规定，仅使用分析纯试剂、重蒸馏水。
2.2.1 甲醇(CH,OH):色谱纯。
2.2.2 甲醇水(7+3):取70 mL甲醇加30 mL水。
2.2.3 甲醇水(8+2):取80 mL甲醇加20 mL水。
2.2.4 甲醇水(45+55):取45 mL甲醇加55 mL水。
2.2.5 苯:色谱纯。
2.2.6 乙睛:色谱纯。
2.2.7 苯乙睛(98+2):取2 mL乙睛加98 mL苯。
2.2.8 抓化钠(NaCI),
2.2.9 磷酸氢钠(NaiH PO,),
2.2. 10 磷酸氢钾(KHzP04).
2.2. 11 (KCl) e
2.2 .1 2 PBS缓冲溶液:称取 8.0 g氯化钠，1.2 g磷酸氢钠，0.2 g 磷酸氢钾，0.2 g 抓化钾，用
990 mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，后用纯水稀释至1 000 ML.
2.2.1 3 吐温-20/PBS溶液(0.1 00):取 1m l吐温-20，加人 PBS缓冲溶液并定容至 10 00m L,
2.2.1 4 pH7.0磷酸盐缓冲溶液:取 25.0 m L 0.2 m ol/L的磷酸氢钾溶液与 29.1 m L 0.1 m ol/L的
氢氧化钠溶液混匀后，稀释到100 mL.
GB/T 18979- 2003
2.2. 15 黄曲霉**标准品(黄曲霉**BB2,GG):纯度)9900
2-2. 16 黄曲霉**标准储备溶液:用苯乙睛(98+2)溶液分别配制。. 100 mg/mL的黄曲霉**B, ,
B2,G,,G:标准储备液，保存于4℃备用。
2.2. 17 黄曲霉**混合标准工作液:准确移取适量的黄曲霉**BB 2,G G:标准储备液，用苯乙
睛(98+2)溶液稀释成混合标准工作液。
2.2. 18 柱后衍生溶液(0.05%碘溶液):称取。. 1 g碘，溶解于20 mL甲醇后，加纯水定容至200 mL,
以0. 45 jam的尼龙滤膜过滤,4℃避光保存。
2.3 仪器和设备
实验室常规仪器、设备及下列各项。
2.3. 1 速均质器:18 000 r/min-22 000 r/mine
2.3.2 黄曲霉****亲和柱。
2.3.3 玻璃纤维滤纸:直径11 cm，孔径1. 5 pme
2.3.4 玻璃注射器:10 mL,20 mLa
2.3.5 玻璃试管:直径12 mm，长75 mm，无荧光特性。
2.3.6 效液相色谱仪:具有360 nm激发波长和大于420 nm发射波长的荧光检测器。
2.3.7 空气压力泵。
2.3.8 微量注射器:100 KLe
2.3.9 色谱柱:C,，柱(柱长150 mm，内径4.6 mm，填料直径5 pm) e
2.4 分析步骤
2.4. 1 提取
2.4.1.1 大米、玉米、小麦、花生及其制品:准确称取经过磨细(粒度小于2 mm)的试样25. 0 g于
250 mL具塞锥形瓶中，加人5. 0 g氯化钠及甲醇水(7+3)至125.0 mL(V,)，以均质器速搅拌提取
2 min。定量滤纸过滤，准确移取15.0 mL(V2)滤液并加人30.0 mL(V,)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤
1-2次，至滤液澄清，备用。
2.4.1 .2 植物油脂:准确称取试样 25.0 g 于 250m L具塞锥形瓶中，加人 5.0 g 氯化钠及加人甲醇水
(7+3)至 125.0m L(V,)，以均质器速搅拌提取 2m in。定量滤纸过滤，准确移取 15.0 M l-(V2)滤液
并加人30. 0 mL(矶)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。
2.4.1.3 酱油:准确称取试样 50.0 g 于 250.0 mL具塞锥形瓶中，加人 2.5 g氯化钠及加人甲醇水
(8十2)至100.0 mL(V4)，以均质器速搅拌提取1 mine定量滤纸过滤，准确移取10. 0 mL(V )滤液
并加人40.0 mL(V,)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。
2.4.1.4 食醋:准确称取 5.0 g 样品，加人 1.0 g 氯化钠，以pH7.0 磷酸盐缓冲溶液稀释至 25.0 m L
(V,),混匀，定量滤纸过滤。取 10.0 nt L(矶)滤液加人 10.0m L(认 )缓冲液，混匀，以玻璃纤维滤纸过
滤1-2次，至滤液澄清，备用。
2.4.2 净化
2.4.2. 1 大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油脂:将**亲和柱连接于20. 0 ml玻璃注射器下。
准确移取15.0 mL(V4)样品提取液注人玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使
溶液以约6 mI./min流速缓慢通过**亲和柱，直至2 mL-3 mL空气通过柱体。以10 mL水淋洗柱
子两次，弃去全部流出液，并使2 mL-3 mL空气通过柱体。准确加人1.0 mL(V)色谱甲醇洗脱，流
速为1 mL/min-2 mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
2.4.2.2 酱油:将**亲和柱连接于 10.0 m L玻璃注射器下。准确移取 10.0 mL(叭)酱油样品提取
液注人玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6 ml-/min流速缓慢通过
**亲和柱。用10 mL 0. 1肠的吐温20/PBS清洗，再以10 m1_水清洗柱子两次，弃去全部流出液，并
使2 mL-3 mL空气通过柱体。准确加人1.0 mL<V)色谱甲醇洗脱，流速为1 mL/min-2 mL/min,
GB/T 18979-2003
收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
2.4.2.3 食醋:将**亲和柱连接于 10.0 m L玻璃注射器下。准确移取 10.0 mL(V,)食醋样品提取
液注人玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6 ml-/min流速缓慢通过
**亲和柱，用10 mL 0. 1写的吐温-20/PBS溶液清洗，再以10 mL水清洗柱子两次，弃去全部流出液，
并使2 mL-3 mL空气通过柱体。准确加入1.0 mL(V)色谱甲醇洗脱，流速为1 mL/min-
2 mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
2.4.3 测定
2.4.3. 1 效液相色谱条件
流动相 :甲醇水(45+55)
流速 : 。 8M L/min
柱后衍生化系统
衍生溶液:。.05%碘溶液
衍生溶液流速:0.2 m L/min
反应管温度:700C
反应时间:1m in
2.4.3.2 定量
用进样器吸取100p L黄曲霉**混合标准工作液(2.2.17)注人效液相色谱仪，在上述色谱条件
下测定标准溶液的响应值(峰或峰面积)，得到黄曲霉**BB2,G,,G:标准溶液效液相色谱图。
参考谱图见图1.
面暇肆怜粗权
卜权盼姗目权八
。妞赞甘扭权八n曰曰
翻。暇麟峥祖枉
41Fka20
招16 14 招10 8
保留时间/min
图 1 B, ,B 2, G G 2 的标准谱图
取样品洗脱液 1.0 m L加人重蒸馏水定容至 2.0 m L，用进样器吸取 100p L注人效液相色谱仪，
在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰或峰面积)。经过与黄曲霉**标准溶液谱图比较响应值得
到试样中黄曲霉** B,、 B2 ,G ,和G:的浓度 :。
2.4.4 空白试验
用水代替试样，按 2.4.1-2.4.3步骤做空白试验。
2.4.5 结果计算
样品中黄曲霉** BB2,G 1或 G:的含量(X,)以微克每千克表示，按式(1)计算:
(c:ca )·V
W
(1)
GB/T 18979- 2003
其中:
w署X(v 开3)XV 4 ，....... . 。.·....···. . (2)
式中:
X,— 样品中黄曲霉**B, ,氏,G，或G:的含量，单位为微克每千克伽g/kg);
c,— 试样中黄曲霉**BB,,G，或G:的含量，单位为微克每升(pg/L) ;
‘。— 空白试验黄曲霉**BB2,G，或G:的含量，单位为微克每升(f'g/L );
V— 终甲醇洗脱液体积，单位为毫升(mL) ;
W— 终净化洗脱液所含的试样质量，单位为克〔9);
，— 试样称取的质量的数值，单位为克(g);
V,— 样品和提取液总体积，单位为毫升(mL) ;
V2 稀释用样品滤液体积，单位为毫升(mL) ;
V3 稀释液体积，单位为毫升(mL) ;
叭通过亲和柱的样品提取液体积，单位为毫升(mL) ,
黄曲霉**总量为BB2,G,,G2的浓度之和，即B,+ B2+ G,+ G2,
计算结果表示到小数点后两位。
**亲和层析净化荧光光度法
3.1 方法提要
试样经过甲醇水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉**特异抗体的**亲和层析
净化，此抗体对黄曲霉** B B2, G G:具有专性，黄曲霉**交联在层析介质中的抗体上。用水
将**亲和柱上杂质除去.以甲醇通过**亲和层析柱洗脱，加人澳溶液衍生，以提测定灵敏度。洗
脱液通过荧光光度计测定黄曲霉**(B,+ 玖+G,十G2)总量。
3.2 试剂和溶液
除非另有规定，仅使用分析纯试剂、重蒸馏水
3.2.1 甲醇(CH30H):色谱纯。
3.2.2 甲醇水(7+3):取70 mL甲醇加30 mL水。
3.2.3 甲醉水(8+2):取80 mL甲醇加20 mL水。
3.2.4 抓化钠(NaCD,
3.2.5 磷酸氢钠(NatH PO,) 。
3.2.6 磷酸氢钾(KH2P O,)o
12. 7 (KCl)
3.2.8 澳溶液储备液(0.0 1%):称取适量澳，溶于水，配成 0.01%的储备液，40C避光保存。
3.2.9 澳溶液工作液(0.002写):取 10m L0 .0 1%的澳溶液加人 40m L水混匀，于棕色瓶中保存备用。
需每次使用前配制。
3.2.1 0 水硫酸奎宁(C,oH z,N zO z·H2SO4，2Hz0),
3.2.1 1 硫酸溶液(0.0 5m ot/L):取 2.8 m L浓硫酸，缓慢加人适量水中，冷却后定容至 10 00m L.
3.2.12 荧光光度计校准溶液:称取3.40 g 硫酸奎宁(CzoH z,N ,0 2·HzS04·2H20)用0.0 5m ot/L硫
酸溶液稀释至100 mL，此溶液荧光光度计读数相当于20 has/L黄曲霉**标准溶液。
3. 3 仪器和设备
实验室常规仪器、设备及下列各项。
3.3. 1 荧光光度计。
3.3.2 谏均质器.18 000 r/min--22 000 r/min
GB/T 18979-2003
3.3.3 黄曲霉毒索**亲和柱。
3.3.4 玻璃纤维滤纸:直径11 cm，孔径1.5 [am.
3.3.5 玻璃注射器:10 mL,20 mI。
3.3.6 玻璃试管:直径12 mm，长75 mm，无荧光特性。
3.3.7 空气压力泵。
3，4 分析步骤
3.4. 1 提取
同 2.4 .1 ,
3.4.2 净化
同 2. 4. 2,
3.4.3 测定
3.4.3. 1 荧光光度计校准
在激发波长 360r an，发射波长450n 条件下，以。.05m ol/L硫酸溶液为空白，调节荧光光度计的
读数值为。.。Fag/L;以荧光光度计校准溶液(3.2.12)调节荧光光度计的读数值为 20.0 F ag/L,
3.4.3.2 样液测定
取上述净化后的甲醇洗脱液加人1.0 m L0 .0 020 o澳溶液，混匀，静置1m in，按3.4.3.1条件进行
操作，于荧光光度计中读取样液中黄曲霉**(B,+ B2+ G,+ G2)的浓度。(Kg/L)e
3.4.4 空白试验
用水代替试样，按 3.4.1--3.4 .3 步骤做空白试验。
3.4.5 结果计算
样品中黄曲霉**(B,+ B2+ G,+ G2)的含量(X2)以微克每千克表示，按式(3)计算 :
(c:CD )·V
W
(3 )
其中:
WV,X V 2
(V2 + V,)
X V, (4)
式中:
X2— 样品中黄曲霉**(B, +残十G 十G2)含量，单位为微克每千克伽g/kg),
c2— 试样中黄曲霉**(B，十Bz +G,十G )的含量，单位为微克每升(FHB/L) ;
‘。— 空白试验黄曲霉**(B,+ B2+ G,+ G2)的含量，单位为微克每升恤B/L);
V— 终甲醇洗脱液体积，单位为毫升(mL) ;
W— 终净化洗脱液所含的试样质量，单位为克(9);
。— 试样称取的质量的数值，单位为克(9);
V,— 样品和提取液总体积，单位为毫升(ML) ;
V— 稀释用样品滤液体积，单位为毫升(mL) ;
V 稀释液体积，单位为毫升(mL);
V,— 通过亲和柱的样品提取液体积，单位为毫升(mL) o

计算结果表示到小数点后位。

上海嘉鹏科技有限公司专业生产：紫外分析仪、三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、暗箱三用紫外分析仪、暗箱紫外分析仪、手提式紫外分析仪、三用紫外分析仪暗箱式、紫外检测仪、部分收集器、恒流泵、蠕动泵、凝胶成像系统、凝胶成像分析系统、化学发光成像分析系统、光化学反应仪、旋涡混合器、漩涡混合器、玻璃层析柱、梯度混合器、梯度混合仪、核酸蛋白检测仪、玻璃层析柱、荧光增白剂测定仪、馏分收集器、切胶仪、蓝光切胶仪、层析系统等产品。欢迎。

上海嘉鹏科技有限公司
电话： 36162366
400免费：4000-123-925
手机：13585698333 18918199710 13501668369
，2880150292，2880150293，2880150290，2880150297

免责声明

凡本网注明“来源：仪表网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-仪表网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：仪表网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
本网转载并注明自其它来源（非仪表网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。