制备液相色谱中，某个状态出现异常可以这样子排除

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来源：苏州汇通色谱分离纯化有限公司 2022年06月12日 08:57

　　对制备液相色谱中的一些常用概念做一下介绍。

　　（1）分析色谱的目的，是分析出混合物中一个（或者几个）纯物质的含量。制备色谱的目的，是从混合物中得到纯物质。为了加快分离的时间与提高分离的效率，制备色谱的的进样品量很大，导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱的直径和长度，使用的相对多的流动相。

　　（2）样品的前处理：

　　（3）制备色谱柱的材质及其特点

　　（4）固定相的选择：

　　（5）装柱方法的选择根据固定相颗粒度和柱子的尺寸，采用不同的装柱方法，往往装填越好分离效果越好。

　　制备液相色谱中，有三个可以观察到的状态：柱压、检测器基线、谱图。通过观察和记录这三个状态可以监测仪器是否正常。若某个状态出现异常，故障排查和解决方案如下。

　　1、柱压波动

　　1）吸液管路进气泡①溶剂不足，吸滤头吸入空气，添加溶剂并排气泡。②吸滤头脏了或堵塞，用异丙醇（或5%稀硝酸）清洗。③溶剂中有气泡（尤其两种以上溶剂混合），超声（或抽滤）脱气。

　　2）泵流量不稳①单向阀堵塞，大流速，若不能解决，则需拆下单向阀（异丙醇）超声清洗清洗或更换单向阀。②柱塞密封圈磨损，更换密封圈。③泵头污染，柱塞杆往复活动受阻，清洗泵头。

　　3）柱床塌陷，维修或更换色谱柱。

　　4）流动相混合后吸放热导致温度变化，以致柱压波动，如乙腈和水混合吸热，甲醇和水混合放热。若影响实验结果，则增加柱温箱或流动相预混。

　　2、柱压升高或超压。逐段排查堵塞的位置：

　　1）先拆下色谱柱，接上两通运行，若是色谱柱堵塞：①进样后样品析出，用合适的溶剂反冲色谱柱。②缓冲盐析出，用大比例水相的流动相冲洗色谱柱。③机械杂质堵塞筛板，异丙醇小流速反冲色谱柱。④色谱柱污染严重，需维修或充填。

　　2）混合器堵塞，维修或更换。

　　3）六通阀堵塞，将泵液管路接到连接色谱柱的阀口处，将阀扳至load状态，用易溶样品的溶剂小流速冲洗。4）压力传感器故障，维修或更换。

　　3、检测器基线波动

　　1）基线有规律波动，且幅度较大，则可能有气泡持续进入流通池。排查气泡来源并用异丙醇冲洗检测器或色谱柱。

　　2）基线小幅度规律波动，可能是检测器灯能量不足（能量下降后，低波长下灵敏度先下降。

　　3）基线漂移。①流动相在此检测波长下有吸收。更换流动相或改变波长。②色谱柱或检测池污染。以异丙醇冲洗色谱柱或检测池，或将检测池中透镜玻片取出清洗。

　　4、谱图重现性差1）检查方法设置，包括流速、梯度、波长。

　　2）检查流动相配置是否有误，A、B两相是否放反。

　　3）检查柱压与之前是否有差异，若有变化，则前面1和2进行排查。

　　4）进样前色谱柱是否*平衡好。

　　5）样品溶解方法。

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