酶联免疫试剂盒正确操作步骤

酶联免疫试剂盒正确操作步骤

酶联免疫试剂盒，即ELISA，是酶免疫测定技术中应用的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA(酶联免疫吸附试验）法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。酶联免疫试剂盒操作步骤：1． 确定检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。5． 将准备好的抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有 明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。