1.液相色谱柱柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

　　1.1压力过高：

　　这是高效液相色谱在使用中***常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。

　　（1）首先断开真空泵的入口处，此时，PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果，液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

　　处理方法：

　　用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，再检查；

　　（2）打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

　　处理方法：

　　将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI（6.7Bar）以下，过滤白头正常，再检查；

　　（3）把液相色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。

　　处理方法：

　　如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

　　假如，按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗液相色谱柱。这时，如果色谱柱柱压仍不下降，只有换色谱柱柱子入口筛板，但是，一旦操作不甚，很容易造成色谱柱柱效下降，所以，尽量少用。

　　1.2压力过低

　　压力过低的现象一般是由于系统泄漏

　　处理方法：

　　寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然，还有一个原因***是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。

　　处理方法：

　　打开Purge阀，用3～5mL/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

　　2.漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。

　　2.1液相色谱基线漂移

　　一般说来，液相色谱仪刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果，你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有***是在低波长下（220nm）平衡时间相对会比较长，但是，如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：

　　①紫外灯能量不足。

　　解决方法：

　　更换新的紫外灯；

　　②柱温波动。

　　解决方法：

　　控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

　　③流通池被污染或有气体。

　　解决方法：

　　用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池（******断开柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用盐酸）。

　　④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。

　　解决方法：

　　检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

　　⑤样品中有强保留的物质（高K'值）以馒头峰样被洗脱出，从而，表现出一个逐步升高的基线。

　　解决方法：

　　使用保护柱，如有必要，在进样之间。在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

　　⑥检测器没有设定在******吸收波长处。

　　解决方法：

　　将波长调整至******吸收波长处；

　　⑦流动相的pH值没有调节好。

　　解决方法：

　　加适量的酸或碱调至******pH值；

　　2.2保留时间漂移

　　保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，***无法进行定性，你要考虑以下原因：

　　①温控不当。

　　解决方法：

　　调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

　　②流动相比例变化。

　　解决方法：

　　检查四元泵的比例阀是否有故障。

　　③色谱柱没有平衡。

　　解决方法：

　　在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

　　④流速变化。

　　解决方法：

　　重新设定流速。

　　⑤泵中有气泡。

　　解决方法：

　　从泵中除去气泡。

　　2.3峰型异常问题

　　峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们***是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。

　　①所有峰均为宽峰。

　　解决方法：

　　系统未达到平衡；

　　溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；

　　色谱柱尺寸及类型选择不正确；

　　色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；

　　温度变化造成的影响。

　　②所出峰比预想的小。

　　解决方法：

　　样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确，定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。

　　③色谱图中未出峰。

　　解决方法：

　　系统未进样或样品分解；

　　泵未输液或流动相使用不正确；

　　检测器设置不正确；

　　针对以上情况成因作相应调整即可。

　　④一个峰或几个峰是负峰。

　　解决方法：

　　流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。

　　⑤所有峰均为负峰。

　　解决方法：

　　信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；

　　光学装置尚未达到平衡。

　　⑥出现双峰或肩峰。

　　解决方法：

　　进样量过大；样品浓度过高；

　　保护柱或色谱柱柱头堵塞；

　　保护拄或色谱柱污染或失效；

　　柱塌陷或形成短通道。

　　⑦前伸峰。

　　解决方法：

　　进样量或样品浓度高；

　　溶解样品的溶剂较流动。