紫外分光光度计的使用经验分享

双光束扫描型紫外可见分光光度计是一类很重要的分析仪器，无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域，还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理部门，有广泛而重要的应用。

双光束扫描型紫外可见分光光度计的几种定量分析方法：

(1)法 目前，法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用较多的一种方法。

(2)标准法

(3)比吸收系数法 比吸收系数法多用于测定样品溶液的浓度。但是，根据比耳定律，被测试样溶液的浓度与吸光度应呈直线关系，而在实际测试中，如果试样的浓度较高时，会发现实际测量到的吸光度值偏离线性关系。这种偏离比耳定律的原因，是由于双光束扫描型紫外可见分光光度计的杂散光、噪声、基线平直度和光谱带宽，以及试样的前处理、试样的化学平衡等所引起的。因此，一般情况下，不采用这种方法。

(4)标准曲线法 常用的定量分析方法是标准曲线法。首先，用标准物质配制一定浓度的溶液，然后，将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下，测试每个标准溶液的吸光度，以吸光度值为纵坐标，标准溶液对应的浓度值为横坐标，绘制标准曲线。将样品溶液按标准曲线绘制程序测得吸光度值，在标准曲线上查出样品溶液对应的浓度或含量。

(5)较小二乘法 较小二乘法实际上也就是回归方程法。因为，分光光度法中试样的吸光度A与试样的浓度C之间的关系可用一条直线来描述。即c=aA+b（o、6为常数）。

应注意两点：

①回归方程是在特定条件下求得的，不能随便套用；

②分光光度法中试样的吸光度A与试样的浓度c之间的关系，应建立在回归方程中的取值范围内，否则，不能随便外推。

(6)解联立方程法 解联立方程法只适用于两个以上、在紫外区吸收峰互不重叠组分的测定，也不是常用的方法。

(7)示差分光光度法 不差分光光度法也不是双光束扫描型紫外可见分光光度计应用中常用的方法。应注意三点：

①示差分光光度法中重要的是选择适当浓度的参比溶液，参比溶液越接近样品溶液，则测定的结果就越准确；

②示差分光光度法解决了普通分光光度法中不适用的高含量或痕量物质的分析问题；

③示差分光光度法要求紫外可见分光光度计的稳定性好、灵敏彦高（噪声小、杂散光小）。