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影响ELISA标本的内源性物质具体讲解

来源:上海抚生实业有限公司   2024年01月29日 13:56  

血清是常用的ELISA标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,影响的内源性物质具体讲解 如下:
有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异 性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig ( s )抗体、交叉反应物质和其它物质等。
1、类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与ELISA系统中的捕捉抗体及酶标记二抗的FC段直接结合,从而导致假阳性。解决该情况的办法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效);③检测抗原时,可以用2 - 巯基乙醇等加入到标本 稀释液中,使RF降解。
2、补体
ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中,抗体分子发生变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连接起来,从而造成假阳性。解决的办法是:①用EDTA稀释标本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。
3、嗜异性抗体
人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig ( s ) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动 物Ig ( s ) ,但加入量不足或亚类不同时无效。
4、嗜靶抗原的自身抗体
抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现,解决的办法是:测定前需用理化方法将其解离后再测定。
5、医源性诱导的抗鼠Ig ( s )抗体
临床开展的用鼠源性CD3等单克隆抗体治疗,用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术,均有可能使这些病人体 内产生抗鼠抗体;另外,被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig ( s )抗体。这些病人ELISA测定时均可产生假阳性。解决的办法是:测定抗原时,在标本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ,从而克服由于上述原因造成的假阳性。
6、交叉反应物质
类de高辛、类AFP样物质等,是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大,但在用单克隆抗体测定抗原时 ,假如交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时,也会出现假阳性结果。
7、标本中其它成分的影响
血清脂质过高、血红蛋白及粘度过大等,均对ELISA测定结果有干扰作用。


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