产品推荐:水表|流量计|压力变送器|热电偶|液位计|冷热冲击试验箱|水质分析|光谱仪|试验机|试验箱


仪表网>技术中心>技术交流>正文

欢迎联系我

有什么可以帮您? 在线咨询

PCR反应中的引物二聚体应对方法

来源:上海邦景实业有限公司   2024年05月27日 13:14  

PCR(聚合酶链式反应)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。如果反应出现了引物二聚体,有许多方法可以减少或消除反应中的引物二聚体。

1、 首先是优化热循环条件,这主要是提高退火温度。大多数情况下,两步循环 (由 95°C 变性步骤直接进入60°C 退火和延伸步骤) 有利于强效扩增,因此引物设计时设定的成功退火温度为 60°C。

2、可降低引物浓度,甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的帮助。大多数情况下,每条引物的理想最终浓度为 200 nM,但如有需要,可将浓度降至 60 nM。

3、镁的最佳浓度一般约为 3 mM。高于此浓度易形成引物二聚体。

4、如果未对引物形成二聚体的倾向进行评估,则应补充评估并考虑重新设计 (如有需要)。通常情况下,最好使用热启动 DNA 聚合酶,并在冰上进行反应。

5、在理论上,针对同一靶点应同时检测多个引物组。这实际上可以节省大量时间,因为如果这些引物中的一个能立即发挥作用,则可以减少花费在优化过。


免责声明

  • 凡本网注明“来源:仪表网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-仪表网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:仪表网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
  • 本网转载并注明自其它来源(非仪表网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。
联系我们

客服热线: 15267989561

加盟热线: 15267989561

媒体合作: 0571-87759945

投诉热线: 0571-87759942

关注我们
  • 下载仪表站APP

  • Ybzhan手机版

  • Ybzhan公众号

  • Ybzhan小程序

企业未开通此功能
详询客服 : 0571-87759942