海洋微微型、微型和小型浮游生物调查

海洋微微型、微型和小型浮游生物调查

技术要求和调查要素

技术要求

采水层次

采水量

浮游植物

水深大于200 m的海区,每次采水不少于1 000 cm2 ;水深小于200 m的海区不少于500 cm‘;发生富营养化或赤潮海区视具体情况而定,一般每次采水100cm3。

浮游动物

采水量依动物的密度而定,一般调查控制在1dm°~50dm'之间。在浮游动物丰富的内湾和发生动物性赤潮的水域,采水量为100 cm*。

垂直拖网深度.

水深大于200 m的海区拖网深度为200 m,水深小于200 m的海区拖网深度从底至表。

垂直分段拖网水层

根据测站深度规定采样水层如表3(有些专项调查可视项目要求根据现场温度、盐度、叶绿素等跃层分段采样)。

连续观测时间与次数

水深小于50 m的海区每3 h采样一次,共采9次;水深大于50 m的海区每4 h采样一次,共采7次。

种类鉴定与计数

除需作特殊处理的微微型、微型浮游生物种类以及培养观察的特殊类群之外,原则上鉴定到种的标本比例应在80%以上;鉴定到属的比例应在90%以上。水采样品每次实际标本镜检数不少于100个~200个;网采样品每次实际标本镜检数不少于500个。

调查要素

调查要素包括微微型、微型和小型浮游生物的种类组成和丰度分布(时间、空间分布)。

采样

采样设备

采水器.

采水器容积可为2.5 dm3、5 dm3或10 dm3。

采泥器

根据条件采用箱式采样器、多管采样器或弹簧采泥器采集甲藻等孢囊样品。

网具

根据调查海区情况和采样对象选用,见表4。

网底管

网底管套的筛绢必须与网衣筛绢的规格相同。

网口流量计

使用前必须经过标定，每航次标定一次。

量角器

角弧形量角器。

沉锤

根据水流速度和风浪大小,使用质量为10 kg~40 kg的铅制沉锤。

绞车及钢丝绳

绞车变速范围为0.3 m/s~1 m/s,并附有排缆装置和钢丝绳计数器，钢丝绳直径为3. 6 mm~5.0 mm。

吊杆

高度为5 m~6 m(深水拖网须大于6 m),负荷为500 kg~1 000 kg;吊杆的舷间距1 m左右,并能调节位置。

冲水设备

水泵、水管、水桶和吸水球等,用于冲喷收集粘贴在网衣或网底管套筛绢上的标本。

采样前的准备

a)根据调查要素、站数、层次计算采样数量,配以足量的样品瓶、相应的固定剂及其他器材。

b) 固定液: 鲁哥氏液(Lugol's solution):100 g溶于1 dm3蒸馏水,加人50 g碘使其溶解,再加人100 cm3冰醋酸;缓冲:商用甲醛(体积分数约为40%)加入同量蒸馏水，1 dm3 约20%的加100 g六次甲基四胺;多聚(体积分数为25%)。

海上采样与样品保存

微微型(光合)浮游生物

a) 主要采集特定水层个体小于2.0 μm的生物;

b)微微型浮游生物包括异养细菌和自养型生物。对于微微型光合浮游生物( photosynthetic pi-coplankton),在此只表述使用落射荧光显微镜,根据其所含色素的荧光特性可区分为单细胞的蓝细菌(cyanobacteria)和微微型光合真核生物( photosynthetic pico-eukaryote),前者 又通常以聚球藻(Synechococcussp)占优势;

c) 采水样使用进口多瓶采水器或国产有机玻璃制成的2.5 dm3采水器;

d) 采集50~200 cm3水样,加多聚固定(1%终浓度),用液氮保存。采样情况记录于表

微型浮游生物

a) 主要采集特定水层个体小于20 μm的微型金藻、微型甲藻、微型硅藻、无壳纤毛虫和领鞭虫等样品;

b) 按预定水层和规定量采集水样。如需去除大于20.0 μm的生物,可先用孔径20 μm的筛绢预过滤。样品用鲁哥氏液固定,每1L水样加人10cm*~15cm3,根据样品的实际浓度可作适当增减。如需要对样品做电镜观察分析，则选用戊二醛固定，根据样品浓度可加人样品体积的2%~5%。采样情况记录于表。

小型浮游生物

a)主要采集水柱中个体小于 200 μm的绝大部分浮游植物、无壳纤毛虫、砂壳纤毛虫、轮虫、桡足类幼体、放射虫和有孔虫等样品;

b)按不同水 深选用小型浮游生物网或浅水II型网进行垂直拖网，拖网速度:落网为0.5 m/s;起网为0.5 m/s~0.8 m/s,样品用缓冲固定,加入量为样品体积的5%,根据样品的实.际浓度可作适当增减,并记录于表;

c) 用手拖定性浮游植物网进行水平(可在网口三根网绳的接合点加一个使锤)或垂直拖网,样品用鲁哥氏液或缓冲固定;

d) 如需要对样品做电镜观察分析,则选用戊二醛固定,根据样品浓度可加入样品体积的2%~5%。

孢囊

a)选择在软质沉积环境如海底凹处和内湾等处采集孢囊沉积物样品;

b) 根据条件采用箱式采样器、多管采样器或弹簧采泥器采样,取沉积物上部10 cm软泥,分别用孔径0.12mm、0.038mm和0.022mm筛网过筛，再对已过筛的样品进行超声波处理以去除杂质;

c)一般对样品进行低温避光保存,固定剂会使孢囊失去部分诊断特征,如需要长期保存,可选用缓冲固定。

样品分析

主要仪器和设备

落射荧光显微镜、光学显微镜、倒置显微镜、沉降器、滤器、支架、抽滤瓶、手持泵或真空泵。

样品编号

各类样品须有总编号。总编号由代表采样海区、采样方式、使用网型、采样年份和样品序号等内容的代号依次组成，每份贮存样品的瓶外须贴有总编号的外标签,瓶内须放有总编号、站号和采样日期等内容的内标签,填写表。

样品分类鉴定与丰度测定

标本鉴定在有条件情况下采用活体与固定样品相结合、网采与水采样品相结合的方法,尽可能获取水体中浮游生物群落的真实信息;定量计数一般以采水样品为准,水柱的定量计数以网采样品为准,网采样品可作为种类组成分析的补充和某些个体大于拖网筛绢孔径的种类的定量计数。

微微型光合浮游生物

a)按照预定层次量取10 cm3~50 cm3水样;

b)通过直径为25 mm、孔径为0.2 μm的黑色核孔滤膜, 抽滤负压不超过50 kPa;

c)取下滤筒,将滤膜放在载玻片.上,在滤膜上加一滴水样,盖上盖玻片(滤膜两面均不能有气泡);

d)在落射荧光显微镜下使用绿光或蓝光激发,一般使用40倍物镜观察,随机取至少20个视野，分别计数具有光亮的桔黄色荧光的含藻红蛋白的聚球藻细胞和呈砖红色荧光的含叶绿素的微微型光合真核生物细胞。计数结果记录于表。

微型和小型浮游生物鉴定与计数

沉降计数法

用于采水样品浮游生物计数, ,计数结果记录于表。

浓缩计数法

用于网采或采水样品浮游生物计数 ,计数结果记录于表。

甲藻孢囊鉴定与计数

浓缩或直接显微计数,计数结果记录于表。

资料整理

丰度计算

落射荧光显微镜计数

甲藻孢囊细胞浓度

孢囊细胞浓度以cells/cm*沉积物或cells/g沉积物干重计算。

填写报表

按本部分的要求和规定填写各种报表。

绘制分布图

平面分布图一般用等值线表示,取值标准如下:

a) 浮游植物细胞总数(网采样品单位为10cells/m',采水样品单位为10'cells/dm3 ): 5,10,50, 100,500,1 000,5 000,10 000;

b) 浮游植物优势种细胞丰度(网采样品单位为10' cells/m’， 采水样品单位为102 cells/dm*): 1,5,10,50, 100,500,1 000,5 000;

c) 孢囊细胞丰度(单位为cells/cm'): 1,10,100;

d) 浮游动物个体丰度(网采样品单位为10ind/m3，采水样品单位为102 ind/dm3 ):1,5, 10,50,100。