高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography  HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用  。

高效液相色谱特点

高效液相色谱法有“四高一广”的特点：

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。

⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

⑥柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物

⑦样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。

故障排除方法

1.从压力变化判断：压力高；压力低；压力波动；
2.泵头漏液

判断:

（1）接口太松（2）泵密封垫磨损；

故障排除:

（1）拧紧泵头螺丝（2）更换密封垫；

3.泵不送溶剂；

判断：

（1）泵头有气泡

（2）使用的溶剂黏性抬高

（3）溶剂贮液器中过滤器脏

（4）排空阀打开

（5）控制器设定不正确

（6）流动相不够；

故障排除：

（1）排气泡，溶剂需脱气；

（2）换低黏性溶剂；
（3）清洗贮液瓶、过滤器；

（4）排空阀打开：关闭排空阀；

（5）控制器设置不正确：设置正确；

（6）流动相不够：补足流动相

4.峰前沿

判断；

（1）柱性能下降

（2）保护柱失效.

（3）进样体积太大或样品浓度太高

故障排除：

（1）更换色谱柱

（2）换柱芯

（3）降低进样体积或降低样品浓度

 5.峰拖尾

判断：

（1）柱性能下降

（2）保护柱失效，

（3）色谱柱或保护柱被污染

（4）色谱柱选择不当

（5）流动相选择不当

故障排除：

（1）更换色谱柱

（2）换柱芯

（3）清洗柱或保护柱，必要时更换

（4）选择恰当的色谱柱

（5）选择恰当的流动相

 6.峰变宽

判断：

（1）柱性能下降

（2）保护柱失效.

（3）色谱柱或保护柱被污染

（4）色谱柱选择不当

（5）流动相选择不当

（6）流动相流速太低

（7）缓冲液浓度太低

（8）系统没到达平衡

（9）进样器问题

（10）环境温度变化

（11）漏夜

（12）出现两个或多个未被

（13）分离的物质的峰

（14）检测器时间常数太大

故障排除：

（1）更换色措柱

（2）换柱芯

（3）清洗柱或保护柱，必要时更换

（4）选择恰当的色谱柱

（5）选择恰当的流动相

（6）调节流速

（7）增加浓度

（8）使系统到达平衡

（9）检查进样器

（10）使用柱温箱

（11）检查漏夜的位置并维修

（12）选择其它色谱条件以改善分

（13）离效果

（14）使用较小的时间常数

 7.峰分叉

判断:

（1）柱性能下降

（2）保护柱失效

（3）色谱柱或保护柱被污染

（4）进样体积太大或样品浓度太高

（5）样品溶剂不溶流动相

故障排除：

（1）更换色普柱

（2）换柱芯

（3）清洗柱或保护柱，必要时更换

（4）降低进样体积或降低样品浓度

（5）改变溶剂或采用流动相溶解样品

 8.无峰

判断：

（1）检测器参数设置错误

（2）样品降解

（3）自动进样器故障

（4）无样品

（5）检测器与数据处理装置链接故障

故障排除：

（1）设置正确的检测器参数

（2）检查样品配制过程，更换样

（3）检查进样器

（4）加样品

（5）检查并正确链接

 9.鬼峰

判断：

（1）样品前处理时产生降解或混入杂质

（2）前一次进样的洗脱物

（3）注射器脏

（4）流动相被污染

（5）柱被污染

（6）六通阀污染

（7）检测器污染

（8）管路污染

（9）流动相中含有稳定剂或稳定剂变化

故障排除：

（1）用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品

（2）增加分析时间或梯度洗脱、提高流速、如问题仍存在，两次进样间用强溶剂冲洗色谱柱

（3）清洗注射器、神洗进样口

（4）清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂

（5）入口过滤器、使用HPLC级

（6）试剂

（7）清洗柱或更换柱

（8）清洗六通阀

（9）清晰检测器

（10）冲洗

（11）使用无防腐溶剂

 10.负峰

出现所有负峰；

判断：

（1）连接数据处理系统信号线接反

（2）记录仪或检测器信号极性相反

故障排除：

（1）正确连接

（2）改变极性设置

 11.出现一个或几个负峰

判断：

（1）离子对分离体系对峰的影响

（2）使用的流动相吸收高

（3）自动进样器注射进空气

故障排除：

（1）在流动相中溶解样品

（2）使用流动相稀释样品

（3）清洗自动进样器

 12.保留时间变化

判断：

（1）系统不问或未达到平衡

（2）室温波动大

（3）柱被污染

（4）溶剂配比不合适

（5）进样体积太大或样品浓度太高

故障排除：

（1）分析之前应有足够的时间使系统平衡

（2）使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境

（3）冲洗柱或更换柱

（4）调节溶剂配比

（5）减小进样体积

 13.保留时间不断变化：

判断;

（1）流速变化

（2）系统没有达到平衡

（3）柱被污染

（4）流动相被污染

（5）系统泄漏

（6）流动相脱气不够充分

（7）室温变化

（8）柱恒温箱设置有误

故障排除：

（1）重新设定流速,检查泵是否正常工作

（2）分析之前应有足够的时间使系统平衡

（3）冲洗柱或更换柱

（4）清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂

（5）检查并进行维修

（6）清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂

（7）使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境

（8）设置正确的温度

 14.基线漂移

判断：

（1）系统不稳或没有达到平衡

（2）室温不稳

（3）流动相污染或分解

（4）流动相脱气不充分

（5）流动相配比不当或流速变化

（6）柱被污染

（7）固定相流失

（8）检测池被污染或有气体

（9）测定的波长选择有误

（10）系统泄漏

（11）样品中有强保留的物质

故障排除：

（1）分析之前应有足够的时间使系统平衡

（2）使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境

（3）清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂试剂

（4）脱气重新平衡系统

（5）更改配比或流速

（6）冲洗柱或更换柱

（7）为说明问题存在，用一-段连接管路代替色谱柱，通流动相检测基线

（8）用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池

（9）使用分光光度计说明背景吸收，如背景值高，说明流动相含有紫外吸收化合物导致基线漂移。使用的流动相应在紫外截止波长以外，或更换溶剂

（10）检查并进行维修

（11）用强度合适的溶剂清洗色谱柱

 15.无规则基线噪音

判断：

（1）系统不稳或没有达到平衡

（2）系统泄漏

（3）流动相污染或分解

（4）柱被污染

（5）色谱柱填料流失或阻塞

（6）流动相混合不均或混合器工作不正常

（7）检测池被污染

（8）系统内有气泡

（9）检测器内有气泡

（10）检测器灯能量不足

故障排除：

（1）分析之前应有足够的时间使系统平衡

（2）检查并进行维修

（3）清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂

（4）冲洗柱或更换柱

（5）更换色谱柱

（6）维修或更换混合器

（7）用甲醇或其他强极性的溶剂神洗流通池

（8）用强极性的溶剂清洗系统

（9）清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

（10）更换灯

 16.规则基线噪音；

判断：

（1）流动相、检测器或泵内有气泡

（2）室温不稳

（3）流动相回收使用

（4）流动相混合不

（5）泵振动

（6）泵入口管路松或阻塞

（7）在同一水平上有其他设备

故障排除：

（1）流动相脱气，冲洗系统除去检测器或泵内的空气

（2）稳定环境温度。使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境

（3）除非特殊需要不使用回收溶剂

（4）使流动相混合均匀或使用低黏度的溶剂

（5）在系统中假如脉冲阻尼器

（6）检查泵入口管路

（7）关掉仪器，检查干扰是否来自于外部