PCR实验操作注意事项

PCR实验操作注意事项:

尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：

1）. 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；

2）. 使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；

3）. 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；

4）. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精-确度；

5）. 后加入反应模板，加入后盖紧反应管；

6）. 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；

7）. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，-好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区；

8）. 重复实验，验证结果，慎下结论。