高效液相色谱仪HPLC保留时间不重现故障解决方法

高效液相色谱仪HPLC时间保留不重现有2种情况，***是保留时间波动和保留时间漂移。
       时间漂移指的是沿着一个方向发生变化，而时间波动则是无规律的波动，吧保留时间漂移和波动分开来对找到问题的原因所在***会有很多帮助。比如：保留时间的漂移是有色谱柱柱子老化引起的。而色谱柱柱子老化又不会引起保留时间的无规律波动，其实，经过研究发现。保留时间漂移的很多原因都是不同机理和性质的色谱柱老化造成的，比如。（固定相流失）（色谱柱污染） 等等


    保留时间漂移的***常见的几种原因：   


一、液相色谱柱平衡      


如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相******平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。      


流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。  


二、固定相稳定性     


固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如硅胶基质在pH4时水解稳定性******。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。      


经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。


三、液相色谱柱污染     


保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。


污染源可以是流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。


样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，***可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。避免色谱柱污染***简单的方法是防患于未然。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。    


四、流动相组成


流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。    


五、疏水坍塌      


当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近****的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或******不保留的现象，这***是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。液相色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱（如赛分色谱柱） 或非端基封口的色谱柱（如赛分色谱柱）也可避免发生坍塌。