RT-qPCR原理的三个主要步骤

来源：上海抚生实业有限公司 2025年07月08日 16:43

RT-qPCR原理的三个主要步骤：

1、反转录：

·使用逆转录酶和特定引物将RNA样品反转录成cDNA。

·该步骤将RNA模板转化为更稳定且可扩增的DNA形式。

·反转录过程中使用特定引物。

2、PCR扩增：

·使用特定引物对cDNA进行PCR扩增，这些引物环绕目标区域。

·PCR是一个循环过程，呈指数级扩增DNA模板的数量。

·PCR反应中包含荧光染料或探针，它们结合到扩增的DNA序列上并发出荧光信号。

3、荧光实时检测：

·使用实时PCR仪器实时监测荧光信号。

·荧光的数量与每个PCR循环中扩增的DNA数量成比例。

·使用专业软件分析数据以确定循环阈值（Ct）值，该值表示荧光信号达到特定阈值水平所需的循环数。Ct值用于计算原始样品中存在的目标DNA量，从而允许进行基因表达或病毒载量等定量分析。

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