丁肝抗体IgM检测试剂盒实验操作注意事项

在实验操作过程中，需特别注意以下几点以确保检测结果的准确性和实验安全：

1. 样本处理规范

血清或血浆样本需避免反复冻融，离心后取上清液时应防止溶血或脂血干扰。若样本存在沉淀物，需二次离心（3000rpm，10分钟）后使用。采集后的样本若不能立即检测，应分装保存于-20℃以下，避免反复冻融导致抗体效价下降。

2. 试剂平衡与质量控制

所有试剂使用前需室温平衡30分钟，摇匀后垂直滴加，避免产生气泡。每批次实验必须设置质控品（阳性/阴性/临界值），若质控结果异常需终止实验并排查原因（如试剂失效、温育时间不足等）。开封后的微孔板应密封保存于2-8℃，湿度低于60%的环境。

3. 温育条件优化

使用恒温箱时需校准温度（37±1℃），建议预实验验证温育时间。避免叠放反应板导致受热不均，推荐使用震荡模式（500-700rpm）以增强抗原抗体结合效率。显色阶段需严格避光，终止反应后10分钟内完成OD值测定。

4. 交叉污染防范

不同样本需更换吸头，洗板时确保每孔注满洗涤液（350μL/孔），浸泡30秒后拍干。建议使用多通道移液器提高洗板一致性。酶标仪读数前需用无尘布擦拭板底，避免指纹或液体残留影响光路。

5. 结果判读要点

临界值（Cut-off）=阴性对照均值+0.15，样本OD值≥1.1倍临界值判为阳性。对于灰区样本（0.9-1.1倍临界值），建议72小时后复测或送PCR确认。实验记录需包含原始OD值、计算过程及环境温湿度数据。