PCR仪使用核心注意事项概述

使用PCR仪时，需要遵循一系列操作和维护保养标准操作规程（SOP），以确保实验的准确性和仪器的正常运行。以下是一些关键的注意事项：

一、实验前准备

1、‌环境要求

l 仪器应放置在水平、通风良好的台面，两侧预留≥30cm散热空间，远离热源、强磁场及腐蚀性物质。

l 室温建议15-25℃，湿度10%-75% RH，避免温湿度波动影响电子元件性能。

2、‌耗材检查

l 使用推荐规格的96孔板/8联管，确保无变形、污染；光学封板膜需透明且密封性良好。

l 反应管与孔壁需紧密贴合（可旋转即不合格），必要时用二氧化硅粉改善导热。

二、操作流程规范

1、‌反应体系配置

l 所有试剂在冰上操作，避免酶失活；设置阴性对照（NTC）和阳性对照。

l 加样时避免气泡，推荐使用多道移液器分装后离心消除气泡。

2、‌程序设置

l 文件名按“项目代码+日期”命名（如B070528-1），确保样本编号与扩增孔位严格对应。

l 温度程序需验证：变性温度95℃±0.5℃，退火温度根据引物Tm值调整。

3、‌运行监控‌

l 运行中禁止开盖，避免温度波动导致扩增失败。

l 实时观察荧光信号变化，异常曲线（如平台期波动）需立即终止程序。

三、仪器维护与保养要点

1. 日常清洁与维护

l 样品槽清洁：实验后用75%酒精擦拭样品槽，去除残留液体；若有试剂泄漏，需立即用去离子水冲洗并干燥。

l 光学模块维护：荧光定量PCR仪的光学通道需定期用专用清洁布擦拭，避免指纹或灰尘影响检测信号。

l 软件与固件更新：关注仪器厂商，及时升级控制软件以优化性能（如赛默飞QuantStudio系列可升级至自动化操作模式）。

2. 定期校准要求

l 温度校准：建议每6个月校准一次加热模块，确保实际温度与设定值偏差≤±0.5℃。

l 荧光检测校准：使用标准荧光染料（如ROX参比染料）验证荧光信号线性范围，保证定量准确性。

四、常见问题处理

1、‌温度异常‌：检查温控模块或更换导热硅脂。

2、‌荧光信号漂移‌：重新校准光学系统或更换滤光片。

3、‌扩增效率低‌：验证引物特异性（熔解曲线单峰）和Mg²⁺浓度（1.5-2.5mM）。

综上所述，PCR仪使用需严格遵循“防污染、控温度、保均一、勤维护”原则，结合实验需求选择合适仪器型号（如32孔小型仪器适合快速检测，96孔板仪器适合高通量实验）。通过规范操作流程、定期校准维护及科学排查问题，可显著提升实验重复性和数据可靠性。‌