兔ELISA实验中，终止反应后读取吸光度的方法步骤

在兔ELISA实验中，终止反应后的吸光度读取需遵循以下关键步骤和注意事项：

1、及时终止反应：

通常使用2M H₂SO₄作为终止液，按照与底物等量的体积加入，例如底物加100μL，则终止液也加100μL，以确保反应均匀终止。

2、加样顺序一致：

为了避免孔与孔之间的显色时间差异，终止液的加样顺序应与底物加样顺序一致。

3、确保反应终止：

加样后轻轻晃动酶标板，确保反应chedi终止，防止某些孔反应不wanquan。

4、酶标仪参数设置：‌

l ‌主波长‌：设置为450nm（TMB终止后显色产物的最大吸收峰）。

l ‌校正波长‌：建议使用570nm或630nm进行双波长校正，以消除微孔板或液体中的光学干扰。

l ‌读数模式‌：选择“吸光度”（Absorbance）模式，并在终止后30分钟内完成读数，避免信号衰减。

5、酶标板清洁：

读数前确保酶标板底部干净，无液体残留、指纹或划痕，以保证吸光度值的准确性。

6、数据记录：

立即记录酶标仪读取的吸光度值，同时记录实验日期、试剂批次、操作人等信息，便于后续结果追溯。

7、操作注意事项：‌

l ‌及时性‌：终止后需立即读数，延迟可能导致沉淀或颜色变化影响准确性。

l ‌微孔板处理‌：确保板底清洁、无气泡或划痕，放置时孔位与光路对齐。

l ‌质控验证‌：每板需包含空白孔、标准品及阴阳性对照，标准曲线R²值应>0.99。

l 终止液需按顺序添加，避免孔间反应时间差异影响结果一致性。

l 若吸光度值出现异常衰减（如梯度下降），需检查显色时间是否充足或终止液质量。

通过以上步骤，可以确保在终止反应后准确读取吸光度值，从而得到可靠的实验结果。