冷冻细胞活化的方法

1、冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。 

2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常（例如产生单株抗体或是其它蛋白质）。 

3、材料 ：37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器 。

4、步骤： 

（1）操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。 

（2）自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。

（3）将新鲜培养基置于37℃水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。

（4）取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。 

（5）取出解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内（稀释比例为1：10～1：15），混合均匀，放入CO2培养箱培养。取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。

（6）解冻后是否立即去除冷冻保护剂（例如DMSO或glycerol），依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内，离心1000rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2培养箱培养。 

（7）若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。