高效液相色谱柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
本文重点介绍液相色谱柱的注意事项、维修、活化方法:高效液相色谱柱在使用前,需要进行柱的性能测试,并将结果存储起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行,只有这样测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
高效液相色谱柱的维修分为: 色谱柱的平衡、色谱柱的再生才是色谱柱的维修。高效液相色谱柱的平衡高效液相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。 高效液相色谱柱的再生长期使用的色谱柱,往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液*流出。
0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够*洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维修.使用预柱保护解析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)。大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围。避免流动相组成及极性的剧烈变化。流动相使用前必须经脱气和过滤处理.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中。氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
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