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货号 | BJ-X97678 |
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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97678 |
商品属性:
名称 小鼠羊膜胚胎细胞 2.组织来源:胎盘组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 小鼠胚胎羊膜细胞分离自羊膜组织;羊膜为单层上皮细胞互相连接构成的薄膜。单层上皮细胞具有分泌羊水的作用。随着胚胎的生长发育,羊膜与绒毛密切紧贴,形成胎膜。胎膜随着羊膜腔逐渐扩大而呈半透明的薄膜,无血管,富有韧性(胎膜也就是羊膜腔的囊壁)。羊膜腔内充满的液体为羊水。羊膜仅覆盖在胎盘的儿体面,并不深入胎盘组织中,随着妊娠的进展羊膜腔逐渐扩大,占据整个子宫腔,羊膜是胎膜最内一层,是一层半透明的薄膜,与覆盖在胎盘、脐带的羊膜层相连接。羊膜是胎盘的最内层,与人眼结膜组织结构相似,含有眼表上皮细胞,包括结膜细胞和角膜上皮细胞生长所需要的物质,其光滑,无血管、神经及淋巴,具有一定的弹性,厚0.02~0.5mm,在电镜下,其分为五层:上皮层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层,羊膜基底膜和羊膜基质层含有大量不同的胶元,主要为i、iii、iv、v、vii型胶原和纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等成份,正是这些成份使羊膜可以充当“移植的基底膜"而发挥一种新的健康合适的基质。羊膜细胞主要由羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞组成,均具有多分化潜能,可转化为神经元,且还有合成、释放生物活性物质和神经营养因子的功能。 5.方法简介: ()实验室分离的小鼠羊膜胚胎细胞采用-胶原酶联合消化法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的小鼠羊膜胚胎细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M234 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态梭形、多角形 传代特性可传1-2代 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠β内啡肽受体(β-EPR)免疫试剂盒现货供应
小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫试剂盒*直销
兔神经型乙酰受体亚基α7(CHRNA7)免疫试剂盒进口、分装
人血小板相关抗体IgM(PA-IgM)免疫试剂盒*直销
人抗心肌抗体(AMA)免疫试剂盒进口、分装
人谷谷草转氨2,线粒体(谷草转氨2)(GOT2)免疫试剂盒进口、分装
人白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)免疫试剂盒进口、分装
人 KIAA1199 免疫试剂盒进口、分装
猴促肾上皮质激素释放激素(CRH)免疫试剂盒现货供应
小鼠羊膜胚胎细胞Prototheca zopfii饶氏无绿藻LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-CDK9 (Thr186) 磷酸化周期素依赖性激9抗体 规格: 0.1ml
Treponema pallidum subsp. Pallidum梅毒螺旋体梅毒亚种探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗小鼠IgM 规格: 0.1ml
Ganoderma灵芝染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周VDCC-L alpha/CCHL1A1 L-型电压依赖型钙通道α抗体 规格: 0.1ml
Enterobacter aerogenes产气肠杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Cyclophilin D 亲环蛋白(亲环素)40抗体 规格: 0.2ml
Low Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV)低致病性猪生殖与呼吸综合症病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Bax Bax抗体 规格: 0.1ml
Equine Herpesvirus(EHV)马疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周VEGF-B 管内皮生因子B抗体 规格: 0.1ml
Semen alpiniae katsumadai草豆蔻探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周TNFRSF12A/TWEAKR/CD266 瘤坏死因子配体超家族成员12A抗体 规格: 0.1ml
Fluoribacter bozemanae博兹曼荧光杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ITPR1 5-三磷酸肌醇受体1抗体 规格: 0.2ml
Capripox Virus羊痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CC85C 卷曲螺旋域蛋白质85C抗体 规格: 0.2ml
Flos buddlejae密蒙花LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周ZEB1/AREB6 负调控因子白细胞介素2抗体 规格: 0.2ml
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