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脉络膜黑色素细胞

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所  在  地上海市

更新时间:2022-05-23 12:18:30浏览次数:100次

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货号 BJ-X97692
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产品名称

脉络膜黑色素细胞

规格

5×10⁵Cells/T25培养瓶

货号

BJ-X97692

商品属性:

名称    脉络膜黑色素细胞

2.组织来源:脉络膜组织

3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介:

脉络膜黑色素细胞分离自眼球脉络膜组织;脉络膜在视网膜和巩膜之间,含有丰富血管和色素细胞,对外力冲击的耐受性较视网膜差,当眼球受到从前面来的外力的冲击作用通过玻璃体传到后极部时,坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用,使脉络膜在内外两种作用夹攻下而发生破裂和出血。脉络膜呈暗褐色,围绕视神经乳头部有照膜,为青绿色带金属光泽的三角形区。脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜,由纤维组织、小血管和毛细血管组成,软而薄,棕红色,在巩膜和视网膜之间,续连于睫状体后方。脉络膜的血循环营养视网膜外层,其含有的丰富色素起遮光暗房作用。主要功能是营养视网膜外层及玻璃体,并有遮光作用,使反射的物象清楚。同时对视觉系统起保护作用,对整个视觉神经有调节作用。续连于睫状体后方,含丰富的血管和色素细胞,有营养和遮光作用。

5.方法简介:

()实验室分离的人脉络膜黑色素细胞先用消化、后-胶原酶混合消化结合专用培养基筛选法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测:

()实验室分离的人脉络膜黑色素细胞Dopa染色检测,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息:

培养基含FBS、生长添加剂、PenicillinStreptomycin

产品货号CM-H239

换液频率每2-3天换液一次;

生长特性贴壁

细胞形态长梭形

传代特性可传1-2

消化液0.25%

培养条件气相:空气,95%CO25%

细胞培养步骤:

.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

图片13.jpg 

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

二.细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

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操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

 

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