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货号 | BJ-X97726 |
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97726 |
商品属性:
名称 小鼠浦肯野细胞 2.组织来源:小脑组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 小鼠浦肯野细胞分离自小脑皮质组织;小脑的表面被覆着一层灰质,叫小脑皮质,小脑皮质分为3层,从表及里分别为分子层、浦肯野细胞层和颗粒细胞层。皮质里含有星状细胞、篮状细胞、浦肯野细胞、高尔基细胞和颗粒细胞等5种神经元。浦肯野细胞发出的轴突组成小脑皮质的传出纤维,终止于小脑白质内的神经核。浦肯野细胞(Purkinje cell)是从小脑皮质发出的能够传出冲动的神经元。人的小脑皮质约有1500万个浦肯野细胞。浦肯野细胞还广泛分布于心室。显著的电生理特点是传导性强,传导速度快,可达4000mm/s。属快反应自律型细胞,具有舒张期自动除极化的性能,因而有自律性,但自律性强度明显低于窦房结P细胞。这类细胞常常平行排列,细胞内电阻低,只有心室细胞的1/3。小脑:浦肯野细胞是小脑皮质中最大的神经元,细胞体呈梨形,顶端发出2~3条粗大的主树突,向外伸入分子层。主树突沿途分支繁茂,形如展开的、扁薄的扇形,铺展在与小脑叶片长轴垂直的平面上。树突分支上有大量的树突棘,与传入纤维构成广泛的突触联系,接受传入小脑的全部信息。轴突由细胞底部(与主树突相对方向)发出,细长,离开胞体不远便形成有髓神经纤维,向内经颗粒层离开皮质进入白质,组成小脑皮质的传出纤维,终止于小脑内部的神经核团。一个浦肯野细胞的轴突约形成500个终末膨大,约与小脑深部核团的35个神经元形成突触。心脏浦肯野细胞常常平行排列,几个细胞互相以浆膜连接排成一个小束,小束外包绕着基底膜。细胞内含肌原纤维很少,胞浆区内充满糖原颗粒、线粒体和肌浆网,细胞内电阻低,只有心室细胞的1/3。浦肯野细胞内无横管系统,但膜电容比收缩细胞大,可能是由于其闰盘结构广泛而复杂,提供了较大的表面积的缘故。浦肯野细胞闰盘的主要成分是缝隙连接,粒着膜占的比例很少,这些可能是构成浦肯野细胞传导快的形态学基础。 5.方法简介: ()实验室分离的小鼠浦肯野细胞采用消化法结合神经元专用培养基、化学试剂抑制法筛选制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶 6.质量检测: ()实验室分离的小鼠浦肯野细胞经Neph3免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件PLL(0.1mg/ml) 培养基含脂质浓缩液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M313 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态神经元细胞样 传代特性不增殖;不传代 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Phenylbutazone(免疫试剂盒进口、分装
小鼠免疫球蛋白A(IgA)免疫试剂盒进口、组装
小鼠T细胞白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)免疫试剂盒进口、组装
山羊(Cortisone)免疫试剂盒进口、分装
人网膜素(omentin)免疫试剂盒进口、组装
人钩端螺旋体IgM(Lebtospira)免疫试剂盒现货供应
人v-rel禽网状内皮细胞过多症病毒癌基因同源物B(RelB)免疫试剂盒进口、组装
牛胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)免疫试剂盒进口、组装
小鼠浦肯野细胞Microsporum gypseum石膏样小孢子LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Forest Encephalitis Virus(即SFV)森林脑炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Semen trichosanthis瓜蒌子染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Canine Corona Virus(CCoV)犬RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Penicillium rugulosum皱褶青霉探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Rhizoma cibotii狗脊染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Fructus momordicae罗汉果PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Microsporum canis 犬小孢子LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Fowl Pox Virus(FPV)禽痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Semen lablab album白扁豆探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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