复苏细胞收到后收集指南

复苏细胞收到后收集指南：

1、请按照说明书提前准备好基础培养基、血清、因子、双抗，不要随意更改培养条件，提前将生物安全柜进行酒精消毒和紫外灭菌。

2、 收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液、培养基浑浊或污染，请拍照后及时联系我们。

3、 细胞在37℃培养箱中静置2-3小时，在倒置显微镜下确认细胞状态，给细胞（100倍×2张，200倍×2张）以及培养瓶（外观×1张）拍照留存，售后时肯定需要提供。

4、 瓶内充液培养基（运输培养基）不能再用来培养细胞，需按照说明书上的培养条件配制新鲜全培养基培养细胞。

5、镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，收集全部充液培养基，250g离心5分钟，弃去培养瓶中充液培养基，用新鲜配制的全培养基重悬未贴壁的细胞，将细胞铺瓶至新的T25细胞培养瓶，补齐全培养基至6mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，立刻对细胞进行传代处理。

注：在快递运送过程中细胞因振动会造成脱落现象，不论继续培养还是传代，未贴壁的细胞均需离心回收。

6、收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 ，保种1支，另外1支传代至T25新瓶，前3代建议均采用1:2传代，若细胞明显达到对数期，1:2传代后第二天就长满，则可提高传代比例，采用1:3传代，前面代次建议代代保种，以妨出现问题后无种可用。

7、 由于细胞在运输过程中失去原有适宜的生长条件且长时间颠簸，收到细胞进行传代后，建议前3-5代培养条件可适当提高血清含量以促进恢复细胞原有状态并缩短到达对数期的时间。

8、 市面上血清鱼龙混杂，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣质血清（小牛冒充胎牛）、水货（国产冒充进口）屡见不鲜，若客户培养细胞过程中明显感觉细胞生长速度不及预期，且无法更换血清，建议酌情提高血清含量来弥补血清质量的缺陷，以期提高细胞生长速度。

9、实验结束后，将台子内的细胞放回培养箱，试剂放回冰箱，最后喷洒Deeming实验室安全卫士，预防微生物污染，关闭生物安全柜，打开紫外灭菌30分钟以上。