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产地 | 进口 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
规格 | 48T/盒 |
编号 | FS-R2560 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
Y2细胞,小鼠成纤维细胞 人卵巢癌顺铂耐药株,COC1/CDDP细胞 人食道上皮细胞裂解物HEEpiCL十五氟辛酸(约5mmol)[离子对色谱级]IPC-PFFA-8 (ca. 5mmol)质量规格:用于液相色谱-质谱的离子对试剂
非洲绿猴肾细胞;CV-1十五氟辛酸,高等级[离子对色谱级]IPC-PFFA-8 HG质量规格:用于液相色谱-质谱的离子对试剂
IGFBP3 Others Human 人 IGFBP3 / IBP3 人细胞裂解液 (阳性对照) 9,10-二甲氧基蒽-2-磺酸钠盐[离子对色谱级]IPA-DAS质量规格:用于氨类的荧光离子对试剂
兔角膜前基质层成纤维细胞;RCFBF敌草隆(标准品)Diuron质量规格:分析标准品,99.5%
MAPK1 Others Mouse 小鼠 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 茜素红Alizarin red质量规格:AR
小鼠树突状细胞肉瘤低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);DG6-VAP33-GFP反式茴香脑(标准品)cis-Anethol质量规格:HPLC≥98%,标准品
CD38 Others Mouse 小鼠 CD38 人细胞裂解液 (阳性对照) 乔松素(标准品)Pinocembrin质量规格:HPLC≥98%,标准品
人膀胱基质成纤维细胞裂解物HBdSFL延胡索甲素(标准品)Corydaline质量规格:HPLC≥98%,标准品
VEGFA Others Human 人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 人细胞裂解液 (阳性对照) 脱氢紫堇碱;去氢紫堇碱(标准品)Dehydrocorydaline质量规格:HPLC≥97%,标准品
人神经元细胞*培养基 100mL小檗红碱(标准品)Berberrubine质量规格:HPLC≥98%,标准品
THP1细胞,人单核细胞型淋巴瘤 人导管瘤细胞,BT-474细胞 非必需氨基酸 100XNEAA4-叔丁基二苯硫醚(>98.0%(GC))4-tert-Butyldiphenyl Sulfide质量规格:>98.0%(GC)
非洲绿猴肾细胞;VERO双(4-羟苯基)硫醚(>98.0%(GC))Bis(4-hydroxyphenyl) Sulfide质量规格:>98.0%(GC)
IL18BP Others Human 人 IL18BPa 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-(二乙基氨基)苯二苯腙(>98.0%(HPLC)(N))4-(Diethylamino)benzaldehyde Diphenylhydrazone质量规格:>98.0%(HPLC)(N)
猴肾细胞;vero IgRCD4-1,1'-二萘胺(>98.0%(HPLC)(N))1,1'-Dinaphthylamine质量规格:>98.0%(HPLC)(N)
IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,2'-二萘胺(>98.0%(GC))2,2'-Dinaphthylamine质量规格:>98.0%(GC)
牛源性成分(Bovine)核酸检测试剂盒貂源细胞米格列奈钙(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Mitiglinide calcium Hydrate
MMP7 Others Human 人 MMP7 人细胞裂解液 (阳性对照) 丙基硫氧嘧啶 /6-正丙基-2-硫代尿嘧啶质量规格:>99%,BRPropylthiouracil
CM-R052大鼠子宫平滑肌细胞*培养基100mL环嗪酮(标准品)质量规格:分析标准品,98%Hexazinone
RSPO2 Others Human 人 FTLS / RSPO2 (186 Leu/Pro) 人细胞裂解液 (阳性对照) 氯吡嘧磺隆(标准品)质量规格:分析标准品,99.5%Halosulfuron-methyl
小鼠关节软骨细胞*培养基 100mL噻螨酮(标准品)质量规格:分析标准品,99.5% Hexythiazox
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