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产地 | 进口 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
规格 | 48T/盒 |
编号 | FS-R2559 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
VEGFA Protein Human 重组人 VEGF 183 / VEGF-A 蛋白脱落酸,S-诱抗素; 壮芽灵Abscisic acid,S-ABA质量规格:95%,BR
小鼠脑膜细胞(MMC)(5×105) CNE1, 人鼻咽癌细胞系 Human胃蛋白酶(1:3000)PEPSIN质量规格:1:3000,BR
兔晶体上皮细胞永生系;N/N1003A(RLE)核糖核酸酶A(sigma)Ribonuclease A from bovine pancreas质量规格:≥50 U/mg,sigma 原装
FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人细胞裂解液 (阳性对照) S-4Andarine质量规格:>98%
气管平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)胃蛋白酶(1:12000)PEPSIN质量规格:1:12000,BR
BMPR2 Others Human 人 BMPR-II 人细胞裂解液 (阳性对照) 反式玉米素trans-Zeatin质量规格:>99%,BR,可用于细胞培养
人膀胱基质成纤维细胞总RNAHBdSF NA氯亚铂酸钾 Dipotassium tetrachloroplatinate质量规格:BR,铂含量 ≥46%,原始铂粉纯度>99.95%
ATF2 Others Human 人 ATF2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 环黄芪醇Cycloastragenol质量规格:HPLC≥98%,标准品
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO Hu 164 SCF 17马兜铃酸AAristolochic acid A质量规格:HPLC≥98%,标准品
QGY-7703细胞,肝癌细胞 表皮癌细胞系,A431细胞 小鼠网织细胞肉瘤;M5076羟基茜草素/红紫素(标准品)Purpurin质量规格:HPLC≥98%,标准品
中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K14-戊氧基苯>98.0%(GC))4-Amyloxybenzaldehyde质量规格:>98.0%(GC)
LDLR Others Mouse 小鼠 LDLR / LDL Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-丁氧基苯>98.0%(GC))4-Butoxybenzaldehyde质量规格:>98.0%(GC)
猴源细胞4,4'-二羟基二苯醚(>98.0%(GC))4,4'-Dihydroxydiphenyl Ether质量规格:>98.0%(GC)
CD58 Others Cynomolgus 食蟹猴 LFA-3 / CD58 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,2'-二羟基二苯醚(>98.0%(GC))2,2'-Dihydroxydiphenyl Ether质量规格:>98.0%(GC)
视网膜色素上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚(>98.0%(GC))4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide质量规格:>98.0%(GC)
猪源性成分(Porcine)核酸检测试剂盒价格GRN Others Mouse 小鼠 GRN / Granulin 人细胞裂解液 (阳性对照) 枸橼酸莫沙比利(标准品)质量规格:≥98%,标准品用于含量测定Mosapride Citrate
CM-R053大鼠卵巢上皮细胞*培养基100mL枸橼酸莫沙比利质量规格:≥98.5%,BR,二水合物Mosapride Citrate
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 青霉素G钠盐质量规格:>1500U/mg,USP,BRPenicillin G, sodium salt
大鼠颗粒细胞RGC青霉素G钠(标准品)质量规格:效价测定Penicillin G, sodium salt
NCI-H1703[H1703]细胞,人肺癌细胞 人膀胱癌细胞,5637(HTB-9)细胞 人视网膜色素上皮细胞HRPEpiC米格列奈钙质量规格:>99%,BRMitiglinide calcium Hydrate
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