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产地 | 进口 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
规格 | 48T/盒 |
编号 | FS-R2555 |
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
CL-0125J82(人膀胱癌细胞)5×106cells/瓶×2替米沙坦酰基-β-D-葡萄糖苷酸Telmisartan Acyl-β-D-glucuronide质量规格:美国进口
P3X63-Ag8.653细胞,鼠骨髓瘤细胞 人Butt`s淋巴瘤细胞,NAMALWA细胞 小鼠网织细胞肉瘤;M5076异烟-d4Isoniazid-d4质量规格:美国进口
AsPC-1(人胰腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2噻托溴铵-d3Tiotropium-d3 Bromide质量规格:美国进口
CX3CL1 Others Human 人 CX3CL1 / N 人细胞裂解液 (阳性对照) 去乙基盐酸胺碘酮-d4Desethyl Amiodarone-d4 Hydrochloride质量规格:美国进口
兔肾细胞;RK-13去乙基盐酸胺碘酮Desethyl Amiodarone Hydrochloride质量规格:美国进口
Colo320DM细胞,人结肠癌细胞 胎儿骨髓间充质细胞,FBM细胞 人永生化淋巴细胞;CNLMG-B5537LC泛昔洛韦(标准品)Famciclovir质量规格:HPLC≥99%,标准品
FRhK-4(恒河猴胚肾细胞) 5×106cells/瓶×2氟达拉滨磷酸酯Fludarabine Phosphate 质量规格:>98.5%,USP,BR
BCAM Others Human 人 BCAM 人细胞裂解液 (阳性对照) 喷昔洛韦Penciclovir质量规格:>98%,BR,细胞培养级
人膀胱平滑肌细胞总RNAHBdSMC NA伊曲康唑Itraconazole质量规格:>99%,EP6,BR,可用于细胞培养
IFNA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 人细胞裂解液 (阳性对照) 伊曲康唑(标准品)Itraconazole质量规格:HPLC>98%,标准品
EB病毒转化的人B淋巴细胞(彝族);HYLD-盐酸伐昔洛韦D-Valacyclovir Hydrochloride质量规格:美国进口
大鼠肝细胞瘤;H4-II-E-C3 结肠腺癌细胞,CW-2细胞 R1610细胞,中国仓鼠仓鼠肺细胞伐昔洛韦杂质FValacyclovir Impurity F质量规格:美国进口
BPH-1, 人前列腺增生细胞 Human4,5-二氯荧光素(>98%,BR)4,5-Dichlorofluorescein质量规格:>98%,BR
ICOSLG Others Human 人 ICOSLG / B7-H2 / ICOSL / CD275 人细胞裂解液 (阳性对照) 对乙氧基苯(>98%,BR)4-Ethoxybenzaldehyde质量规格:>98%,BR
滑膜细胞培养基SM4-羟基(>98%,BR)4-Hydroxycoumarin质量规格:>98%,BR
布尼亚病毒(BV)核酸检测试剂盒价格NCI-H520[H520]细胞,人肺癌细胞 人膀胱癌细胞,EJ细胞 人心肌细胞HCM氯吡脲;氯吡苯脲;吡效隆质量规格:>98%,BRForchlorfenuron,4-CPPU,CPPU,KT-30
长白山猪胚胎皮肤成纤维样细胞;201184醋酸镁四水(分子生物学级)质量规格:>99%,分子生物学级Magnesium acetate, tetrahydrate
MMP9 Others Human 人 MMP-9 / CLG4B 人细胞裂解液 (阳性对照) 萘丁美酮/萘普酮(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Nabumetone
CM-R060大鼠肾动脉内皮细胞*培养基100mL地瑞拉韦质量规格:>98%Darunavir
JAM3 Others Human 人 JAM3 / JAM-C 人细胞裂解液 (阳性对照) 沃氏物质量规格:含量≥85%Methoxydienone
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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