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产地 | 进口 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
规格 | 48T/盒 |
编号 | FS-R2551 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
兔主动脉平滑肌细胞;SMC三尖杉碱(标准品)Cephalotaxlen质量规格:HPLC≥98%,标准品
CSK Others Mouse 小鼠 CSK / C-Src kinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 辽东楤木皂苷Ⅹ(标准品)Araloside Ⅹ质量规格:HPLC≥98%,标准品
脐动脉内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)硫酸氨基葡萄糖(标准品)Glucosamine sulfate质量规格:HPLC≥98%,标准品
蚊子幼虫体细胞;Aedes albopictus clone C6/36 人肺癌细胞,NCI-H1299细胞 A-431(表皮癌细胞)硫酸黄连碱(标准品)Coptisine Sulfate质量规格:HPLC≥98%,标准品
人低分化肺腺癌细胞;GLC-82 [GLC82]硫酸软骨素(标准品)Chondroitin sulfate质量规格:HPLC≥98%,标准品
人肺泡上皮细胞 (HPAEpiC)( 1×106 )非对称二甲基精氨酸ADMA质量规格:>98%,盐酸盐形式,美国进口
CL-0279WL1(大鼠肺细胞)5×106cells/瓶×2N'-硝基-D-精氨酸N'-Nitro-D-arginine 质量规格:0.98
绿色荧光蛋白标记人胃癌细胞;MGC803-GFP 大鼠成年表皮角质形成层细胞*培养基 100mLD-天冬酰胺,一水D-Asparagine monohydrate质量规格:0.99
L1210 小鼠白血病细胞D-天冬氨酸D-Aspartic acid 质量规格:0.98
MMP8 Others Human 人 MMP-8 / CLG1 人细胞裂解液 (阳性对照) D-天冬氨酸4-叔丁酯D-Aspartic acid 4-tert-butyl ester质量规格:0.98
活/死细胞染色试剂盒CSK2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基二苯甲酮(>90.0%(GC))2,2'-Dihydroxy-4,4'-dimethoxybenzophenone质量规格:>90.0%(GC)
GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4'-二羟基二苯甲酮(>98.0%(GC)(T))4,4'-Dihydroxybenzophenone质量规格:>98.0%(GC)(T)
人类原巨核细胞型白血病细胞;UT-74A分子筛(80-100目,气相、液相色谱柱)Molecular sieves, 4 Å质量规格:80-100目,气相、液相色谱柱
HHCC细胞,人肝癌细胞 小鼠肺癌细胞,Lewis细胞 牦牛皮肤细胞;BMU-S1分子筛4A(2mm-3mm,干燥剂用 )Molecular sieves, 4 Å质量规格:2mm-3mm,干燥剂用
ME-180(人子宫颈表皮癌细胞) 5×106cells/瓶×2分子筛4A(beads,4-8 mesh )Molecular sieves, 4 Å质量规格:beads,4-8 mesh
亨德拉病毒(EMV)核酸检测试剂盒价格IFNAR1 Others Human 人 IFNAR1 / IFNAR 人细胞裂解液 (阳性对照) 春雷霉素;春日霉素; 克死霉质量规格:>60%,BRKasugamycin
小鼠前脂肪细胞*培养基 100mL土拉霉素A,托拉菌素A,泰拉霉素质量规格:>95%Tulathromycin A
B16-F0-EGFP (稳定株)小鼠黑色素瘤细胞 B16-F0-EGFP (stable sain) of mouse melanoma cells DMEM+10% FBS+200ug/ml G418拉米夫定质量规格:>98%,BR,USP可用于细胞培养Lamivudine
IL35 Protein Human 重组人 IL-35 (IL12A & IL27B) 蛋白 (Fc 标签)拉米夫定(标准品)质量规格:HPLC>99%,标准品Lamivudine
WPMY-1(人正常前列腺基质永生化细胞) 5×106cells/瓶×2 C2C12, 小鼠肌原细胞盐酸三氟拉嗪质量规格:>99%Trifluoperazine dihydrochloride
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