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产地 | 进口 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
规格 | 48T/盒 |
编号 | FS-R2482 |
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
人结直肠腺癌细胞;COLO 320DM [COLO320DM] 大鼠肾小管上皮细胞*培养基 100mL硝呋酚酰肼;硝呋奇特Nifuroxazide质量规格:>99%
MLTC-1 小鼠间质细胞瘤细胞硝呋酚酰肼;硝呋奇特(标准品)Nifuroxazide质量规格:HPLC>99%,标准品
EDA2R Others Human 人 EDA2R / XEDAR / TNFRSF27 人细胞裂解液 (阳性对照) 千金藤素Cepharanthine质量规格:HPLC ≥98%,BR
小鼠垂体瘤细胞;GT1-1千金藤素(标准品)Cepharanthine质量规格:HPLC≥98%,标准品
BTC Others Human 人 BTC / Betacellulin 人细胞裂解液 (阳性对照) 醋酸卡泊芬净Caspofungin Acetate质量规格:>97%,BR
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞;MuM-2C核苷酸胶体染料Green-DNA Dye,SYBR Green I质量规格:BR
NCSTN Others Human 人 NCSTN / Nicasin 人细胞裂解液 (阳性对照) D-葡萄糖无水D-Glucose质量规格:>99.5%,分子生物学级
人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2咪唑Imidazole质量规格:AR
ACE2 Others Rat 大鼠 ACE2 / ACEH 人细胞裂解液 (阳性对照) L(+)-阿拉伯糖L(+)-Arabinose质量规格:>98%,BR
NCI-H661 人大细胞肺癌细胞去离子甲酰胺Formamide deionized质量规格:>99%,分子生物学级
MCF7B细胞,人癌细胞 人癌Tamoxifen耐药株,LCC2细胞 脂肪细胞生长添加物PAGS脱氢硝苯地平Dehydro Nifedipine质量规格:美国进口
水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S4脱氢硝苯地平-d6Dehydro Nifedipine-d6质量规格:美国进口
IL1RL1 Others Human 人 IL1RL1 / DER4 人细胞裂解液 (阳性对照) 7-苄氧基-N-des{[2-(2-羟基)乙氧基]乙基} 喹硫平7-Benzyloxy-N-des{[2-(2-hydroxy)ethoxy]ethyl} Quetiapine质量规格:美国进口
卵巢上皮细胞培养基OEpiCM-prf喹硫平quetiapine质量规格:美国进口
KIRREL3 Others Mouse 小鼠 KIRREL3 人细胞裂解液 (阳性对照) 7-羟基喹硫平7-Hydroxy Quetiapine质量规格:美国进口
河弧菌(VF)核酸检测试剂盒图片TNFSF10 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 TNFSF10 / AIL / APO-2L 蛋白盐酸度洛西汀质量规格:>99%,BRDuloxetine hcl
人骨髓间充质干细胞(骨髓)(HMSC-bm)(5×105) MGC80-3(MGC-803)人胃癌细胞 Human盐酸度洛西汀(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Duloxetine hcl
EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0905克拉霉素质量规格:>97%,USP34,BRClarithromycin
人脐带动脉平滑肌细胞 (HUASMC)( 5×105 )克拉霉素(标准品)质量规格:HPLC>95%,标准品Clarithromycin
CM-H072人肾成纤维细胞*培养基100mL克林霉素磷酸酯质量规格:克林霉素含量>758μg/mg,USP32Clindamycin Phosphate
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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