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产地 | 进口 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
规格 | 48T/盒 |
编号 | FS-R2425 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
FUT10 Others Human 人 FUT10 / Fucosylansferase 10 人细胞裂解液 (阳性对照) 酸性品红Acid Fuchsin质量规格:BS
小鼠胚胎成纤维细胞;3T6-Swiss albino茜素络合指示剂(IND)Alizarin complexone质量规格:IND
AZGP1 Others Human 人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 茜素络合指示剂(高纯级,98%)Alizarin complexone质量规格:高纯级,98%
人肠静脉内皮细胞*培养基 100mL偶氮胂 IArsenazo I质量规格:AR
HFSF细胞,人胚胎眼巩膜成纤维细胞 啤酒酵母 小鼠髋动脉内皮细胞;PIEC碱性品红(生物染色级)Basic Fuchsin质量规格:BS(生物染色级)
人前列腺癌细胞;LNCaP甲磺酸多拉司琼(标准品)Dolasetron mesylate 质量规格:HPLC>99%,标准品
CD4 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD4 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸多塞平Doxepin HCl 质量规格:>99%,BP2008,BR
CM-H114人前脂肪细胞*培养基100mL盐酸多塞平(标准品)Doxepin HCl 质量规格:HPLC>98%,标准品
9811C11细胞,人胃癌细胞 人骨肉瘤细胞,SW1353细胞 人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2盐酸度洛西汀Duloxetine hcl质量规格:>99%,BR
EAC(小鼠艾氏腹水癌细胞) 5×106cells/瓶×2盐酸度洛西汀(标准品)Duloxetine hcl质量规格:HPLC>98%,标准品
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) L-谷氨酸钠,一水L-Glutamic acid monosodium salt hydrate质量规格:>99%
牛肾细胞;MDBK(BVDV-free)DL-苦杏仁酸DL-Mandelic acid质量规格:AR
CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人细胞裂解液 (阳性对照) 抗坏血酸;维生素CAscorbic acid;vitamin C质量规格:AR;>99%
人肺成纤维细胞*培养基 100mL维生素C(标准品)Ascorbic acid;vitamin C质量规格:含量测定
OCM-1细胞,人眼脉络黑色素瘤细胞 绳状青霉 小鼠T淋巴细胞瘤细胞;Cyc-Tag(S49)十八胺; 十八烷基胺; 硬脂胺Octadecanamine质量规格:AR
山羊痘病毒(GTPV)核酸检测试剂盒供应商I 型胶原细胞检测试剂盒Col硫酸小诺霉素/硫酸小诺米星/硫酸沙加霉素质量规格:含量≥590 µg/mgMicronomicin Sulfate
CLMP Others Rat 大鼠 ASAM / CLMP 人细胞裂解液 (阳性对照) 小诺霉素(标准品)质量规格:效价测定Micronomicin Sulfate
人小梁网细胞*培养基 100mL齐墩果酸质量规格:HPLC≥95%,BROleanolic acid
CMT93细胞,小鼠结肠癌细胞 NCL-H460(非小细胞肺癌) 水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S4齐墩果酸(高纯98%)质量规格:HPLC≥98%,BROleanolic acid
EFNA5 Protein Human 重组人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (His 标签)齐墩果酸(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Oleanolic acid
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