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产地 | 进口 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
英文名称 | Staphylococcus capitisPCR |
编号 | FS-R2165 |
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
CADM3 Others Human 人 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 人细胞裂解液 (阳性对照) 吲达帕胺Indapamide质量规格:>99%,EP6.0,BR
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A吲达帕胺(标准品)Indapamide质量规格:HPLC>98%,标准品
CLEC5A Others Cynomolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 碘帕醇(标准品)Iopamidol质量规格:HPLC>98%,USP
角膜内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)碘帕醇Iopamidol质量规格:>98%,USP
Ec109细胞,食管癌细胞 人卵巢癌细胞,COC1细胞 人脉络丛内皮细胞cDNAHCPEC cDNA盐酸洛哌丁胺Loperamide HCl质量规格:>98%,BR
人真皮成纤维细胞-总RNAHDF-a NA萘酚AS-MX磷酸酯(>98%,BC)Naphthol AS-MX phosphate质量规格:>98%,BC
小鼠小脑星形胶质细胞(MA-c)(5×105)草酸钾一水(>98%,BC)Potassium oxalate, monohydrate质量规格:>98%,BC
中国仓鼠肺细胞;CHL酒石酸氢钠一水(>98%,BR)Sodium bitartrate, monohydrate质量规格:>98%,BR
小鼠肺腺癌低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);LA1-VAP33-GFP 小鼠虹膜色素上皮细胞*培养基 100mL硫酸钠十水(>99%,BC)Sodium sulfate, decahydrate质量规格:>99%,BC
293T, SV40转化的人胚肾上皮细胞系 Human司班40Span* 40质量规格:BR
Promocell C-28015 Mesenchymal Stem CellNeurogenic Differe. Medium, 间充质干细胞神经性分化培养基(即用型) 100ml吡罗昔康(标准品)Piroxicam质量规格:HPLC>98%,标准品
人冠状动脉内皮细胞HCAEC泊沙康唑Posaconazole质量规格:>99%
SERPINE1 Others Rat 大鼠 SerpinE1 / PAI-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 泊沙康唑(标准品)Posaconazole质量规格:HPLC>98%,标准品
非洲绿猴肾细胞;CV-1利福昔明Rifaximin质量规格:>98.0%,可用于细胞培养
大鼠骨髓瘤细胞;Y3-Ag 1.2.3 肺腺癌细胞,SPC-A-1细胞 B/c-ES细胞,BALB/c小鼠ES细胞利福昔明(标准品)Rifaximin质量规格:>98%,标准品
头状葡萄球菌PCR检测试剂盒大鼠肾系膜细胞;RMC棕榈酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))质量规格:standard for GC,≥99%(GC)Ethyl palmitate
SMAD5 Others Mouse 小鼠 Smad5 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 异辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))质量规格:Standard for GC,≥99.5%(GC)2-Ethylhexanoic acid
肺成纤维细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)吲达帕胺质量规格:>99%,EP6.0,BRIndapamide
人脑微血管内皮细胞 人肺癌细胞,NCI-H520[H520]细胞 SAC-IIB2(腹水瘤细胞)吲达帕胺(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Indapamide
人导管癌细胞;ZR-75-1碘帕醇(标准品)质量规格:HPLC>98%,USPIopamidol
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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