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小鼠25羟基维生素D3elisa试剂盒品牌

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更新时间:2018-04-12 13:10:07浏览次数:195次

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产地 国产 加工定制
适用领域 科研
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小鼠25羟基维生素D3elisa试剂盒品牌特点:
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小鼠25羟基维生素D3elisa试剂盒品牌检测中样品的处理
1.细胞培养物上清:细胞培养物于室温1000g,离心10分钟后收集上清,并将标本保存于-20,且应避免反复冻融。
2.血清:标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g4离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20保存,但应避免反复冻融。
3.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8,1000g离心15分钟,或将标本放于-20保存,但应避免反复冻融。
4.尿液:无菌收集取初尿,离心除去沉淀物,即可用于检测,要长期保存尿样,可以加入0.05%的NaN34-8保存,或加入尿样冰冻保护液放入-20冰箱长期保存。
5.组织匀浆:将组织标本先用PBS洗涤,除去多余血液,匀浆化后放在PBS-20放置过夜,再经过二次反复冻融破膜,5000g4离心5分钟,取上清即可检测。注:取样和样品处理过程中,防止有毒物质对操作人员的危害,要采取相应的保护措施。
小鼠25羟基维生素D3elisa试剂盒品牌操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1800ng/L1200ng/L600ng/L300ng/L150ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。
4. 配液:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048T20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3
8. 洗涤:操作同5
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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