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货号 | FS-X10267 |
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产品介绍:
英文名称:Dorsomorphin dihydrochloride 产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Dorsomorphin dihydrochloride是一种有效的ATP竞争性的选择性AMPK抑制剂,Ki为109±16nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:1219168-18-9 别名:BML-275 dihydrochloride;Compound C dihydrochloride 纯度:99.73% 分子量:472.41 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
中文名称:AMPK抑制剂
英文名称:Dorsomorphin dihydrochloride
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
货号:FS-X10267
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
杂色曲霉纤毛内转运同源蛋白46抗体Human ROGDI 蜥蜴状腺原(T3)免疫试剂盒
无白介-10受体a抗体Human PDK1([Pyruvate dehydrogenase [lipoamide]] kinase isozyme 1, mitochondrial) 蜥蜴甲状腺(T4)免疫试剂盒
门多萨假单胞菌白介-13受体a1抗体Human RNMTL1 蜥蜴睾(T)免疫试剂盒
鸭疫里氏杆菌免疫相关鸟三磷基因抗体Human RNPC3 蜥蜴雌二(E2)免疫试剂盒
埃里链格孢白介-13受体a2抗体Human RNPS1 蜥蜴25羟基胆固(25-OHC)免疫试剂盒
沃氏富盐菌嗜粒趋化蛋白CCL1抗体Human RNPEP 蜥蜴17羟孕(17-OHP)免疫试剂盒
鲍姆木层孔菌磷化胰岛样生长因子1受体抗体Human ROBO1 鲨鱼
酿酒酵母胰岛降解抗体Human ROBO3 鲨鱼孕激/孕(PROG)免疫试剂盒
香菇白介12抗体Human ROCK1 鲨鱼状腺原(T3)免疫试剂盒
异配囊接霉原变种白介4抗体Human PDK1([Pyruvate dehydrogenase [lipoamide]] kinase isozyme 1, mitochondrial) 鲨鱼皮质(Cortisol)免疫试剂盒
脓肿分枝杆菌胰岛样生长因子结合蛋白9抗体Human KPRP(KeRatinocyte proline-rich protein) 鲨鱼甲状腺(T4)免疫试剂盒
弯孢霉干扰-gamma受体2抗体Human RNF25 鲨鱼睾(T)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌白介27受体抗体Human RNPC3 鲨鱼雌二(E2)免疫试剂盒
Buttiauxella 白介-1受体拮抗剂抗体Human RNF26 其它
盔状毕赤酵母KB抑制蛋白激γ抗体Human RNF34 新德里超级细菌金属β-内酰-1(NDM-1)免疫试剂盒
栖沉积物海菌磷化KB抑制蛋白激γ抗体Human RNF4 小尾寒羊增食欲(orexin)免疫试剂盒
: AJ12909FERMBP4736资源名称: 大肠埃希氏菌 质量规格:分析标准品葫芦巴碱盐盐
拟康氏木霉Trichoderma│pseudokoningii 质量规格:分析标准品,99%槐角碱
链霉菌Streptomyces│sp. 质量规格:分析标准品,98%香紫苏
AMPK抑制剂仁果壳小圆孢 苯并呋喃-3-弓形虫IgM抗体
嗜热脂肪地芽孢杆 2-氨基-3-甲氧基酪蛋白
耐寒短杆 反式-(1R,2R)-2-氨基环戊盐盐a胶质系来源的神经营养因子
黑曲霉 2,4-二-5-基嘧啶b胶质系来源的神经营养因子
西宫皮生球 3-甲基-1H-吲唑乙型肝炎病表面IgG抗体
阿魏侧耳 3,3'-双噻吩络丝蛋白
枯草芽孢杆 N,1-双(叔丁氧羰基)-L-组双环己盐抗神经节脂抗体
苏云金芽孢杆 2-甲基-5-甲氧基反神经调节脂抗体
佛雷德里克斯堡假单胞 2-氨基嘧啶-5-羧神经节脂
单胞属 贝特6-磷果糖激-1
灰略红链霉 甲基-4,6-O-亚苄基-Α-D-吡喃葡糖II型胶原蛋白
大肠埃希氏 3,5-二羟基苯甲酰肥大蛋白
草菇 2-氨基-3--5-26S蛋白体
秃裸链霉 O-乙基异脲盐盐嗜性粒过氧化物
Actinokineospora 2-二苯并[b,f][1,4]氧氮杂卓-11(10H)-酮Ⅱ
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