小鼠胚胎干细胞；ES-D3（CRL-1934）说明书 返回列表页

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细胞名称  小鼠胚胎干细胞；ES-D3(CRL-1934)说明书
形态特性  球形克隆 　
生长特性  　贴壁生长
特征特性   小鼠胚胎干细胞；在缺乏滋养层或条件培养基时，这株细胞自发分化成胚胎结构。 它们可以注射回胚泡。 未分化细胞可以通过基因靶向技术进行基因改良。贴壁生长；形成球形克隆。
培养条件  干细胞培养基　
传代方法   
传代情况  PN
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS　
支原体检测  　阴性
STR   
同工酶

染色体

使用权限 B类
小鼠胚胎干细胞；ES-D3(CRL-1934)说明书操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
小鼠胚胎干细胞；ES-D3(CRL-1934)说明书注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
小鼠胚胎干细胞；ES-D3(CRL-1934)说明书美国菌种保藏中心， 又称美国模式菌种收集中心(ATCC)，是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的，非赢利性组织。目前它可以提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC成立于1925年，是世界上大的生物资源中心，由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理，是一家性、非盈利生物标准品资源中心。ATCC向发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品，推动科学研究的验证、应用及进步 ATCC可以提供以下类别生物标准品：细胞株（3000多种）；菌株（15000多种）；动植物病毒株（2500多种）以及重组物质等。
Campy-CefexSupplement

细菌总数显色培养基 Total Genes Chromogenic Medium 用于快速、准确检测细菌总数，培养24小时，细菌显红色

缓冲李氏菌增菌肉汤基础添加剂 Buffered Listeria Enrichment Broth Supplement 1ml*5支 每支加入225ml缓冲李氏菌增菌肉汤基础中

钠胰蛋白胨大豆肉汤250g/瓶用于金黄色葡萄球菌的增菌incubationmedia钠胰蛋白胨大豆肉汤250g/瓶用于金黄色葡萄球菌的增菌

煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB(含小倒管) 10ml*20支/包 用于大肠菌群、大肠杆菌的测定
Campy-CefexSupplement

细菌总数显色培养基 Total Genes Chromogenic Medium 用于快速、准确检测细菌总数，培养24小时，细菌显红色

缓冲李氏菌增菌肉汤基础添加剂 Buffered Listeria Enrichment Broth Supplement 1ml*5支 每支加入225ml缓冲李氏菌增菌肉汤基础中

胰蛋白胨大豆肉汤250g/瓶用于金黄色葡萄球菌的增菌incubationmedia胰蛋白胨大豆肉汤250g/瓶用于金黄色葡萄球菌的增菌

煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB(含小倒管) 10ml*20支/包 用于大肠菌群、大肠杆菌的测定
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB22220250g用于多管发酵法测定大肠菌群的确证试验(GB4789.3-2002)。

沙保氏葡萄糖琼脂 (CM0041) Oxoid incubation media 沙保氏葡萄糖琼脂 (CM0041) Oxoid

纳地青霉 用于做清酒“木通口”的糖化菌 支/瓶

SD-39琼脂250g用于滤膜法大肠杆菌0离培养(NEOGEN方法)

支原体半流培养基 250g 用于支原体的培养
小鼠肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1)ELISA试剂盒 ，英文名： DAG1 ELISA Kit

人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA检测试剂盒Humancholineacetylase,CHAcELISAKit 96T/48T

大鼠细胞色素P450(CYP450)免疫试剂盒 Rat cytochrome P450,CYP450 ELISA Kit

英文名称RatNN-T4ELISAKit大鼠新生甲状腺素(NN-T4)规格：96T/48T

果蝇DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20次

ELISAKitPDGF人血小板衍生生长因子规格：48T/96T
人心纳素(ANF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

猪免疫球蛋白G(IgG)免疫试剂盒 Porcine Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit

HumanPlaetFactor4,PF-4ELISAKit 人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanmembraneIgD,mIgDELISA试剂盒人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)ELISA试剂盒规格：96T/48T

组织乙醇脱氢酶III活性比色法定量检测试剂盒20次

HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
小鼠胚胎干细胞；ES-D3(CRL-1934)说明书兔血清一氧化氮(NO)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Rat oxidized low density lipoprotein (OxLDL) ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试剂盒

HumanAdenovirusIgM,ADV-IgMELISAKit 人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanfreehaemoglobin,f-HbELISA试剂盒人游离血红蛋白(f-Hb)ELISA试剂盒规格：96T/48T

组织半胱氨酸蛋白酶-2(PASE-2)活性比色法定量检测试剂盒20次

Humanneurofilameprotein,NFELISAKit人神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒规格：96T/48T