EGF人表皮生长因子ELISA试剂盒实验原理 返回列表页

公司“质量是企业是生命之源”，选购优势如下：
1*抗体——、灵敏、特异
2操作——吸附均匀、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的优化方案——回收利用率高、可靠性强
4适用于体液、组织匀浆，细胞培养上清液、尿液等各种类型的样本。
5可检测指标齐全：生长因子、炎症因子、脂肪因子、基质金属蛋白酶等等

ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。 但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有：
①标本因素；
②试剂因素；
③操作因素。在实验过程中请严格按照使用说明操作，必能得出准确的实验结果，可提供免费技术咨询服务！

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样本实验前准备：
ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
（5）培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（6）组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准
Pachysolen tannophilus 嗜鞣管囊酵母Pachysolen tannophilus冻干物，斜面安全等级:1酿造酒精；利用戊碳糖。酵母膏 3.0g，麦芽浸膏 3.0g，蛋白胨 5.0g，葡萄糖 10.0g，琼脂 20.0g，蒸馏 1.0L。传代方法①冻干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂轮在冻干管壁划两圈，掰断，用200μL无菌或培养基:充分溶解，平板涂布，活化培养。 ②斜面：试管口用75%酒精擦拭后，火焰灼烧，后用无菌接种铲切块，挑取接入平板或斜面，培养。生长条件:24℃，好氧存储条件:2-8℃冷藏，冻干管10年以上，斜面1-3个月。 纯度：98%

Escherichia coli SC 志贺性大肠埃希氏菌Escherichia coli SC分离基物:腹泻病例粪便标本冻干物安全等级:2模式菌株:no营养肉汁琼脂： 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生长条件:37℃，好氧存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Lichtheimia│ramosa 总状横梗霉Lichtheimia│ramosa斜面培养物安全等级:1模式菌株:no酿造黄酒。CM0077生长条件:28-30℃存储条件:真空冷冻干燥法 纯度：97%

Corynebacrium ammoniagenes 产氨棒杆菌Corynebacrium ammoniagenes冻干物安全等级:1模式菌株:no研究；。发酵法三磷腺苷(ATP)。普通琼脂：牛肉浸液 1.0L，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，琼脂20.0～25.0g，pH7.2～7.4。[注] 牛肉浸液的制备：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min后备用。生长条件:28-30℃。好氧。生长特性G+，抗染色阴性，菌体短杆状，单个排列，两端圆形，无芽胞，无荚膜，不运动。菌落圆形，表面光滑，稍凸起，边缘整齐，灰白色，有光泽。培养液混浊，无气味，无沉落物。不液化明胶。发酵葡萄糖、果糖和麦芽糖。葡萄糖发酵型，V.P阴性，M.R.阴性，不解淀，不分解纤维素，吲哚反应阴性，不产H2S，脲酶阳性，接触酶阳性，兼性厌氧。高生长温度42℃。石蕊牛奶反应性，利用硝盐。发酵三磷腺苷（ATP）的产量为2-3 g/L。存储条件:2-8℃真空冷冻干燥法 纯度：97%

Bacillus subtilis subsp. subtilis 枯草芽胞杆菌枯草亚种Bacillus subtilis subsp. subtilis冻干物安全等级:1模式菌株:no用于提取聚谷氨。LB，哥伦比亚血平板，好氧生长条件:30℃存储条件:真空冷冻干燥法 纯度：98%

Klebsiella rrigena 土生克雷伯氏菌Klebsiella rrigena分离基物:活性污泥冻干物安全等级:1模式菌株:no环境污处理NB生长条件:37℃,好氧，24h，阴性杆菌，纯存储条件:真空冷冻干燥法 纯度：98%

Salmonella saintpaul 圣堡罗沙门氏菌Salmonella saintpaul分离基物:进口冻火鸡二节翼冻干物安全等级:2模式菌株:no研究、质量控制营养肉汁琼脂培养基:：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。121℃，15min。生长条件:36℃，好氧存储条件:真空冷冻干燥法 纯度：98%

Salmonella agona 阿贡纳沙门氏菌Salmonella agona分离基物:冻鸡分割品冻干安全等级:2模式菌株:no研究、质量控制。营养肉汁琼脂培养基:：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。121℃，15min。生长条件:37℃，好氧存储条件:真空冷冻干燥法 纯度：≥98%
EGF人表皮生长因子ELISA试剂盒实验原理玫瑰红钠琼脂角质生长添加物肾上皮Nestin  巢蛋白（神经上皮干蛋白）（抗原）

0.5%葡萄糖肉汤培养基角质生长添加物(不含BPE)输尿管上皮AR Alpha1( Alpha1-adrenergic receptor)  α1肾上腺素能受体抗原

肉汤琼脂培养基角质生长添加物(不含动物成分)肾实质Apelin36  脂肪炎症因子Apelin36

普通琼脂斜面培养基（pH8.0-8.2）黑色素生长生长添加物肾系膜Nestin  巢蛋白（神经上皮干蛋白）（抗原）

甘露琼脂培养基黑色素生长添加物(不含TPA)膀胱上皮ASCL1/MASH1(Achaete-scute homolog 1)  神经母特异性转移因子抗原

酪胨琼脂成纤维生长添加物膀胱平滑肌ASPP1(apoptosis stimulating protein of P53 1)  p53凋亡激蛋白1抗原

葡萄糖蛋白胨培养基成纤维生长添加物-2肾动脉内皮ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2)  P53凋亡激蛋白2抗原

抗生素检定培养基4号成纤维生长添加物(不含动物成分)肾动脉平滑肌neurofasciu-155  神经束蛋白-155