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货号 | FS-X10348 |
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中文名称:PERK抑制剂(GSK2606414)
英文名称:GSK2606414
产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
货号:FS-X10348
产品介绍:
英文名称:GSK2606414 产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg GSK2606414是一种具有选择性的PERK抑制剂,IC50值为0.4nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:1337531-36-8 纯度:99.18% 分子量:451.44 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
短密青霉肌球蛋白轻链激抗体Human PICP(C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(I) chain) 磷化乙酰(PaCoA)
大肠埃希氏杆菌MYCBPAP抗体Human IMPA2(Inositol monophosphatase 2) 磷化腺活化蛋白激(pAMPK)
香菇组织相容性复合体蛋白1抗体Human CARTPT(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript protein) 磷化腺活化蛋白激(AMPK)
扩散炭层菌线粒体核糖体蛋白S22抗体Human COL1A1(Collagen Type I Alpha 1) 磷化外信号调节激(pERK)
毛栓孔菌棕榈酰化膜蛋白7抗体Human PTTG2(Securin-2) 磷化糖原合激3β(pGSK3B)
泡囊短波单胞菌小鼠抗单克抗体Human COL2A1(Collagen alpha-1(II) chain) 磷化糖原合成激3(pGSK-3)
乳乳球菌乳亚种肌球蛋白轻链1/3抗体Human PTTG1IP(Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein) 磷化肌球蛋白轻链(PMLC)
葡萄座腔菌属磷化肌球蛋白轻链抗体Human NUSAP1(Nucleolar and spindle-associated protein 1) 磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)
大肠埃希菌肌肉特异性泛蛋白连接1抗体Human OxLDL(Oxidized low-density lipoprotein) 磷化蛋白激C(P-PKC)
产气列契瓦尼尔氏菌泛蛋白连接抗体Human PIIINP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(III) chain) 磷化蛋白激B(P-PKB)
大肠埃希菌单羧转运蛋白2抗体Human MYOCD(Myocardin) 磷化cAMP反应元件结合蛋白1(pCREB1)
芬尼青霉可溶性苹果脱氢抗体Human NRN1(Neuritin) 磷甘油变位2(PGAM2)
云芝栓孔菌(变色栓菌)蛋白激C亚性D型抗体Human MITF(Microphthalmia-associated transcription factor) 淋巴趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)
枝孢属磷化µ-型阿片受体抗体Human LMAN2(Vesicular integral-membrane protein VIP36) 淋巴抗原6复合物基因座A(Ly6a)
链霉菌磷化丝裂原活化蛋白激激1/2抗体Human MDH2(Malate dehydrogenase, mitochondrial) 淋巴功能相关抗原3(LFA-3/CD58)
酿酒酵母基质金属蛋白9抗体Human MMP17(Matrix metalloproteinase-17) 淋巴功能相关抗原2(LFA-2/CD2)
美澳型核果褐腐病菌Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey 质量规格:>98%,BR盐甜菜碱
淡紫拟青霉(新引种)Paecilomyces lilacinus 质量规格:粘度100000mPa.s甜菜碱
: SK1023/61资源名称: 坎德拉沙门氏菌 质量规格:4000mPa.s,BR鼠李糖
PERK抑制剂(GSK2606414)竹喙球 2-硝基乙降钙基因相关肽
枯草芽胞杆 (S)-1-叔丁氧羰基-3-氨基降钙受体
产黄青霉 巴豆酰降钙受体样受体
黑葱花霉 (-)二异松蒎基烷降钙原
苏云金芽孢杆 3-戊烯-2-酮胶原Ⅲ
棘孢曲霉 甲酰肼胶原I
金龟子绿僵 2--3-三氟胶原II
香菇 D-葡萄庚糖胶质系来源的神经营养因子
Talaromyces macrosporus 4-正基乙炔角蛋白15
大肠埃希氏 乙乙酯角化生长因子
香菇 2-甲基-2-戊烯结缔组织生长因子
葡萄座腔 O-甲基-L-酪结构型一氧化氮合
毛柄(金针菇) 4-乙苯结合珠蛋白
白假丝酵母 4-乙氧基睫状神经营养因子
红曲霉 甲基-PEG4-NHS酯解偶联蛋白1
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