PI3Kγ抑制剂(AS-605240)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10802

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：PI3Kγ抑制剂(AS-605240)

英文名称：AS-605240

产品规格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

货号：FS-X10802

产品介绍:

AS-605240是一种有效的特异性PI3Kγ抑制剂，IC50值为8nM，Ki值为7.8nM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：648450-29-7

纯度：98.0%

分子量：257.27

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

嗜糖土地芽孢杆菌人胸腺活化调节趋化因子Anti-N4BP2L2 Antibody人preptin

耐寒短杆菌小鼠血管紧张转化Anti-NAB2 Antibody人preptin

植物维生AAnti-NACAD Antibody人过氧化物体增殖物激活受体α(PPAR-α)

HIV假病 GX24.8植物维生EAnti-NANOGP8 Antibody人过氧化物体增殖物激活受体α(PPAR-α)

耐久肠球菌小鼠血管紧张ⅡAnti-NAXE Antibody人载脂蛋白E(Apo-E)

聚生壳菌大鼠血管紧张Ⅱ转化Anti-NANOGP8 Antibody人载脂蛋白E(Apo-E)

棒形孢拟盘多毛孢兔内皮型一氧化氮合成Anti-NBEAL1 Antibody人成骨生长肽(OGP)

慢生根瘤菌人神经粘附分子配体1Anti-NBPF12 Antibody人成骨生长肽(OGP)

枯草芽孢杆菌植物维生D2Anti-NBPF5P Antibody人破骨分化因子(ODF)

猴假单胞菌人神经保护因子Anti-NBR1 Antibody人破骨分化因子(ODF)

Aestuariispira insulae小鼠角化内分泌因子/双调蛋白Anti-NBPF5P Antibody人羟基胶原吡啶交联(OH-PYD)

假单胞菌兔尿激型纤溶原激活物受体Anti-NBPF7 Antibody人羟基胶原吡啶交联(OH-PYD)

相思根瘤菌大鼠血管紧张Ⅰ转化Anti-NCAPG Antibody人脱氧胶原吡啶交联(DPD)

泡囊短波单胞菌兔尿激型纤溶原激活物Anti-NCAPH Antibody人脱氧胶原吡啶交联(DPD)

小孢根霉华变种植物维生D3Anti-NCAPG2 Antibody人胶原吡啶交联(PYD)

根瘤菌小鼠活化AAnti-NCBP1 Antibody人胶原吡啶交联(PYD)

环指蛋白74抗体重组激活基因1苏云金芽孢杆菌莫里逊亚种小鼠脐带间充质干细胞

重组激活基因2蛋白抗体苏云金芽孢杆菌玉螟亚种非何杰金氏淋巴瘤细胞

环指蛋白75抗体苏云金芽孢杆菌巴基斯坦亚种人喉癌上皮细胞

RIT1蛋白抗体苏云金芽孢杆菌励木亚种小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)
PI3Kγ抑制剂(AS-605240)佛雷德里克斯堡假单胞 3%NaCl碱性蛋白胨水胶质系来源的神经营养因子

糙皮侧耳 GN增液绒毛膜促性腺β

淡紫拟青霉盐胱增液SC巨噬集落激因子

泡盛曲霉 3,5-二甲基-1-苯白介3

孢青霉含225mL胰酪胨大豆多粘肉汤均质袋环瓜肽

禽腺病Ⅴ型 L型细高渗盐增培养基抗角蛋白抗体

紫花链霉检定培养基血肌酐

禾谷丝核种芽孢培养基沉默调节蛋白1

黑曲霉细保存培养基血管扩张激磷蛋白

Naumannella? (S)-(+)-香芹酮蛋白C

镰刀 6.5%NaCl葡萄糖琼脂维生A

麦根腐平脐蠕孢乳成套生化鉴定管番茄红

大肠埃希硫庆大霉可溶性糖蛋白130

云芝 4,6-二甲基-2-巯基嘧啶过氧化物体增殖物激活受体γ辅激活子1α

樟疫霉含青霉TSA培养基平板天门冬氨基转移
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)