FAK抑制剂(PND-1186)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10449

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：FAK抑制剂(PND-1186)

英文名称：PND-1186

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

货号：FS-X10449

产品介绍:

英文名称：PND-1186

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

PND-1186可逆地抑制FAK活性，IC50为1.5nM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：1061353-68-1

别名：SR-2516;VS-4718

纯度：99.71%

分子量：501.5

结构式：

PND-1186结构式

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

大肠埃希菌G蛋白偶联受体p2y12抗体Anti-CFP Antibody淀粉样前体蛋白(APP)

糙皮侧耳G蛋白偶联受体p2y8抗体Anti-CHAT Antibody次级淋巴组织趋化因子6Ckine(CCL21)

黑曲霉G蛋白偶联受体p2y9抗体Anti-CGRPR(CALCRL) Antibody成纤维生长因子9(FGF9)

松球壳孢菌蛋白酪磷相互作用蛋白51抗体Anti-CHAT Antibody成纤维生长因子23(FGF-23)

黑根霉菌内皮纤溶原激活抑制蛋白1抗体Anti-CHAT Antibody成纤维生长因子23(FGF23)

盘长孢状盘孢前列腺相关P抗原家族成员1抗体Anti-CHAT Antibody层粘连蛋白(Laminin)

香蕉生假丝酵母磷化酪抗体Anti-CHAT Antibody层连蛋白(Laminin)

果生链核盘菌猪蓝耳病病M蛋白抗体Anti-CHD2 Antibody表皮生长因子受体2(sp185/Her2)

长谷川赤担孢酵母桥粒斑菲蛋白1抗体Anti-CHD2 Antibody表皮生长因子受体2(Her2)

地锤菌属突触样蛋白1抗体Anti-CHEK2 Antibody表皮生长因子受体(EGFR/ErbB1)

红曲霉蛋白调解因子6抗体Anti-CHEK1 Antibody表皮生长因子受体(EGF-R)

樟疫霉神经丛蛋白B3抗体Anti-CHGA Antibody表皮生长因子受体(EGFR)

阿舒假囊酵母PHD指蛋白21A抗体Anti-CHEK2 Antibody半乳糖凝集3(Galectin-3)

链球菌(不定种)富含脯蛋白11抗体Anti-CHI3L1 Antibody半乳凝3(GAL-3)

枯草芽孢杆菌三磷腺受体受体P2X3抗体Anti-CHEK2 Antibody(PB0732)半乳凝3(GAL3)

异常威克汉姆酵母相关血浆蛋白A抗体Anti-CHM Antibody白介8(IL-8)

链霉菌属菌种Streptomyces│sp. 质量规格：0.98

费氏中华根瘤菌Sinorhizobium│fredii 质量规格：>98.5%,BR

嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas│maltophilia 质量规格：>99%,二肽肽-4(DPP-4)抑制剂
FAK抑制剂(PND-1186)非洲哈茨木霉 4-氟葡萄糖氧化

奇异变形 2-氟-4-羟基苯甲敏感性脂肪

盐城海杆二(2,6,10-十二碳三烯-1,12-二基)钌(IV)脂蛋白酯

半软干酪居真细 1,5-环辛二烯(六氟乙酰酮)(I)铱肝脂

大肠埃希氏杆 4-氟苯基苯乙酮强啡肽

灰黄青霉 5-溴异喹啉血管紧张转换抑制剂

枯草芽孢杆甲基烯二环戊基酯脂肪β氧化

鸡油 2-三氟甲基喹啉二酰基甘油酰基转移

冠突曲霉 1-[3-(trifluoromethoxy)phenyl]ethanol硫角质

环状芽孢杆 5-羟基-1-茚酮鸟核交换因子4

葡萄座腔 (R)-(-)-3-甲基-2-丁鸟核交换因子4

多粘类芽孢杆 2,2′-联嘧啶肥大β类胰蛋白

苏云金芽孢杆 4-溴苯甲砜Rhodes激

枯草芽孢杆 2-(4-溴苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶线粒体呼吸链复合物IV

果生链核盘 2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲线粒体呼吸链复合物V
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)