FGFR抑制剂(NVP-BGJ398)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10353

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：FGFR抑制剂(NVP-BGJ398)

英文名称：NVP-BGJ398

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

货号：FS-X10353

产品介绍:

英文名称：NVP-BGJ398

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

NVP-BGJ398是一种有效的FGFR抑制剂，抑制FGFR1，FGFR2，FGFR3和FGFR4，IC50分别为0.9nM，1.4nM，1nM和60nM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：872511-34-7

别名：Infigratinib;BGJ-398

纯度：99.88%

分子量：560.48

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

酿酒酵母神经元膜糖蛋白锚定蛋白2抗体Human NCOA1(Nuclear receptor coactivator 1) 可溶性髓系触发受体-1(sTREM-1)

黄硬皮马勃MYRIP蛋白抗体Human SLC30A8(Zinc transporter 8) 可溶性瘦受体(sLR)

球孢白僵菌髓磷酯髓鞘蛋白1抗体Human GRIN1(Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 1) 可溶性凝集样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)

大豆慢生根瘤菌巨噬克激因子抗体Human SLC25A12(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar1) 可溶性磷脂A2(sPL-A2)

单胞菌膜相关环指蛋白4抗体Human UBAP2(Ubiquitin-associated protein 2) 可溶性间皮相关肽(SMRP)

链格孢肌球蛋白轻链激抗体Human FSCN2(Fascin-2) 可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)

木糖驹形氏杆菌单纺锤体蛋白激1抗体Human REG3γ(RegeneRating Islet Derived Protein 3 Gamma) 可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)

芽孢杆菌属有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白2抗体Human CDC42(Cell division control protein 42 homolog) 可溶性核因子κB受体活化因子(sRANK)

细链格孢单氧化B抗体Human S1PR2(Sphingosine 1-phosphate receptor 2) 可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)

野油菜黄单胞菌微小染色体维持缺陷蛋白4抗体Human S1PR3(Sphingosine 1-phosphate receptor 3) 可溶性淀粉前体蛋白α(sAPPα)

拟青霉自噬微管相关蛋白轻链3抗体Human S1PR4(Sphingosine 1-phosphate receptor 4) 可溶性蛋白185(sp185/HER-2)

产色链霉菌髓鞘基因调控因子抗体Human LPL(Lipoprotein lipase) 可溶性弹性蛋白片段(sELAF)

淡紫拟青霉肌球蛋白结合蛋白C抗体Human TAC1(Protachykinin-1) 可溶性半乳糖结合凝集3(Lgals3)

变天蓝链霉菌磷化丝裂原活化蛋白激磷1抗体Human PFN2(Profilin-2) 可溶性白抗原G(sHLA-G)

肉桂链霉菌促代谢型谷受体2抗体Human MCAb(Melanocyte antibody) 可溶性白介7受体(sIL-7R)

羊巴贝斯虫（天祝株）代谢型谷受体-3抗体Human NDN(Necdin) 可溶性P选择(sP-selectin)

大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格：700u/mg，罗氏分装盐育亨宾

黄曲霉Aspergillus│flavus 质量规格：98%,标准品木糖

毛霉Mucor│sp. 质量规格：98%,BR七叶皂钠
FGFR抑制剂(NVP-BGJ398)链霉 (R,R)-2,6-双(4-苯基-2-噁唑啉-2-基)吡啶磷化AKT蛋白

芽孢杆 (S)-(+)-2-(苯基)吡咯烷磷化c-Jun氨基末端激

茯苓乙(1R,2S)-2-[N-苄基-N-(苯基磺酰)氨基]-1-苯基酯[交叉反应用试剂]磷化IKB alpha

嗜麦芽寡养单胞 (R)-(+)-α,α-二苯基脯氨磷化N-甲基-D-天冬

戊糖乳杆 R-1,1'-联-2-萘磷化p38丝裂原活化蛋白激

侧耳 (1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙磷化Tau蛋白

嗜冷德沃斯氏 (1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙磷化α-氨基羟甲基恶唑

酿酒酵母 (+)-2,2'-[(3aR,8aS)-3a,8a-二氢-8H-茚苯[1,2-d]并噁唑磷化酪激

长枝木霉 (S,S)-N,N'-双(三氟磺酰)-1,2-二苯基乙二磷化酪激

芽胞杆 (-)-苯并四咪唑磷化外信号调节激

*蛹虫草 (2S,3S)-(+)-2,3-双(二苯基膦基)双环[2.2.1]庚-5-烯磷化外信号调节激

产萨顿 (2R,3R)-(-)-2,3-双(二苯基膦)双环[2.2.1]庚-5-烯磷化腺活化蛋白激

施氏假单胞 (+)-苯并四咪唑磷肌激

芽孢杆 (2S,3S)-(-)-双(二苯基膦)丁烷磷激1

嗜盐盐单胞 (1S,2S,4S,5S)-2,5-双(3,5-二叔丁基-2-羟基苯亚甲基氨基)双环[2.2.1]庚磷烯式酮羧激
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)