恒河猴肾细胞；MMK3培养 返回列表页

细胞名称 恒河猴肾细胞；MMK3培养

形态特性  上皮样，多角形 　
生长特性  　贴壁生长
特征特性   该细胞来源于一雌性猕猴的肾组织。2000年由中国科学院昆明细胞库建立。
培养条件  M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS　
传代方法   1：2传代；3-4天一次
传代情况  P3
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS　
支原体检测  　荧光法（-）
STR   -
同工酶

染色体

使用权限 B类
恒河猴肾细胞；MMK3培养操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
恒河猴肾细胞；MMK3培养注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
恒河猴肾细胞；MMK3培养美国菌种保藏中心， 又称美国模式菌种收集中心(ATCC)，是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的，非赢利性组织。目前它可以提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC成立于1925年，是世界上大的生物资源中心，由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理，是一家性、非盈利生物标准品资源中心。ATCC向发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品，推动科学研究的验证、应用及进步 ATCC可以提供以下类别生物标准品：细胞株（3000多种）；菌株（15000多种）；动植物病毒株（2500多种）以及重组物质等。
牛津琼脂基础26060用于单核增生李斯特氏菌的选择性分离(SN0005)。

GC 琼脂基础 (CM0367) Oxoid incubation media GC 琼脂基础 (CM0367) Oxoid

食酸菌 酸奶 支/瓶

VioletRedBileDextroseAgar

琼脂培养基M 250g 于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。
碳酸氢钠琼脂基础250g用于炭疽杆菌的荚膜培养

Dextrose casein-peptone agar 葡萄糖酪蛋白琼脂 1.10860.0500 MERCK默克 incubation media Dextrose casein-peptone agar 葡萄糖酪蛋白琼脂 1.10860.0500 MERCK默克

氨苄青霉素麦康凯琼脂基础 250g 用于致病性嗜水气单胞菌的选择性分离培养(SN/T 0751-2010)

食蟹猴骨髓间质干细胞成脂诱导分化培养基Cynomolgusmonkeybonemar
孟加拉红培养基(虎红琼脂)2250g供霉菌和酵母的计数、分离和培养用

麦康凯肉汤 (CM0005) Oxoid incubation media 麦康凯肉汤 (CM0005) Oxoid

棉铃虫拟青霉 CAMP test 支/瓶

三糖铁(TSI)琼脂250g生化培养基，用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选(GB标准)

抗生素检定培养基1号(PH6.5-6.7) 250g 用于药品抗生素效价测定
CM-R015大鼠胰岛细胞*培养基100mL

CHN1 Others Human 人 CHN1 / Chimerin 1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

人晶状体上皮细胞HLEpiC

长尾绿猴胚胎细胞;4179 病毒转染小鼠细胞，PT-67细胞 SMMC-7721(肝癌细胞)

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY1036

ICAM3 Others Human 人 CD50 / ICAM3 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-R015大鼠胰岛细胞*培养基100mL

CHN1 Others Human 人 CHN1 / Chimerin 1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

人晶状体上皮细胞HLEpiC

长尾绿猴胚胎细胞;4179 病毒转染小鼠细胞，PT-67细胞 SMMC-7721(肝癌细胞)

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY1036

ICAM3 Others Human 人 CD50 / ICAM3 人细胞裂解液 (阳性对照)
恒河猴肾细胞；MMK3培养SELL Others Human 人 SELL / CD62L / L-selectin 人细胞裂解液 (阳性对照)

支气管上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

LTK 小鼠结缔组织纤维细胞

CM-H026人淋巴内皮细胞*培养基100mL

A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株

人肺腺癌细胞;Calu-3 大鼠气管上皮细胞*培养基 100mL
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