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货号 | FS-01S63729 |
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产品名称:SNiR土壤亚硝酸还原酶检测试剂盒微量法
规格:100管/48样
检测方法:微量法
货号:FS-01S63729
商品介绍:
测定意义 土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一,参与亚硝酸盐至NO的还原反应,它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率,为氮素转化规律的研究提供一定的依据。 测定原理 亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少,即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。 需自备的仪器和用品 天平、、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。 |
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细胞或组织样品的制备: 培养细胞:先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),超声波破碎细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样品:直接检测。 |
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。 3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。 |
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SNiR土壤亚硝酸还原酶检测试剂盒微量法溴化镁(六水) 98%4--4’-硝基联 98%CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 单核趋化蛋白5抗原
4-甲磺酰异酯 96%N,N-二乙1,1,2,3,3,3-六氟 95%CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14) 嗜粒趋化蛋白14抗原
碳二酯 99%三氟甲磺铁(II) 95%ABCD-1/CCL22 嗜粒趋化蛋白22抗原
硫代乙铵 试剂级,70%溶液三氟磺铟 98%MIP-3 beta/ELC/CCL19(Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta) 巨噬炎性蛋白19抗原
叔丁基异硫酯 99%三氟甲磺镧 99%CCL26(Eotaxin 3) 嗜粒趋化蛋白3抗原
巯基乙乙酯 98%三氟甲磺锂 98%CCR-1(CC chemokine receptor 1) 表面趋化因子受体1抗原
3-巯基 98%三氟甲磺镥 98%CCR-3(CC chemokine receptor 3) CC趋化因子受体3抗原
巯基乙甲酯 96%三氟甲磺镁 98%CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A) 表面趋化因子受体2A抗原
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