硫氧还蛋白-1（Trx-1）抑制剂(PX-12)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X11017

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：硫氧还蛋白-1（Trx-1）抑制剂(PX-12)

英文名称：PX-12

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

货号：FS-X11017

产品介绍:

PX-12(IV-2)是可逆的硫氧还蛋白-1（Trx-1）抑制剂;抑制MCF-7和HT-29cells细胞生长的IC50值分别为1.9和2.9μM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：141400-58-0

别名：IV-2

纯度：99.58%

分子量：188.31

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

假乙热厌氧杆状菌Pseudomonas luteola大鼠血管紧张Ⅰ(Ang-Ⅰ)

死亡谷芽孢杆菌Pseudomonas luteola大鼠黑色抗体(MC Ab)

枯草芽孢杆菌Pseudomonas marginalis大鼠黑色抗体(MC Ab)

小红酵母Pseudomonas marginalis大鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)

红皮碱线菌Pseudomonas marginalis大鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)

污黑腐皮壳Pseudomonas marginalis大鼠过敏/补体片断4a(C4a)

团炭角菌Pseudomonas marginalis大鼠过敏/补体片断4a(C4a)

球孢白僵菌Pseudomonas marginalis pv. margnalis大鼠过敏/补体片断4a(C4a)

地衣形芽孢杆菌Pseudomonas marginalis pv. margnalis大鼠过敏/补体片断4a(C4a)

根癌土壤杆菌Pseudomonas marginalis pv. alfalfa大鼠补体片断5a(C5a)

芽孢杆菌Pseudomonas marginalis pv. pastinacae大鼠补体片断5a(C5a)

解藻弧菌Pseudomonas marginalis大鼠补体片断3a(C3a)

液化根霉Pseudomonas marginalis pv. pastinacae大鼠补体片断3a(C3a)

三叶草根瘤菌Pseudomonas marginata大鼠卵泡抑(FS)

灰褐链霉菌Pseudomonas mendocina大鼠卵泡抑(FS)

芽胞杆菌Pseudomonas mendocina大鼠组织蛋白去乙酰化(HD)

一种肿瘤抑制基因抗体C端叶点霉属一氧化氮(NO)比色法测试盒

血小板活化因子受体抗体农业微生物菌种农业微生物菌种农业微生物菌种亚硝盐比色法测试盒

干扰诱导蛋白p58ipk抗体异型酒香酵母总(T-GSH)/氧化型(GSSG)比色法测试盒

抑制/肿瘤抑制因子抗体忍冬木层孔菌总抗氧化能力(T-AOC)比色法测试盒(ABTS催化法)
硫氧还蛋白-1（Trx-1）抑制剂(PX-12)链霉泽泻 K 23-醋酯

草木樨中华根瘤 11-去氧泽泻B

蜡样芽孢杆 1,3,5-三羟基咕吨酮

掘氏疫霉* 1,3,7-三羟基-9H-氧杂蒽-9-酮

黄曲霉蓝V

果生链核盘 13-羟基氧化小檗碱

泡盛曲霉鲁诺单钠盐

栎生青霉 3-O-阿魏酰奎尼

长柄链格孢二甲苯蓝FF

阿维链霉 4-O-阿魏酰奎尼

鼠伤门氏苦参C

黑木耳苦参X

硬结节杆 7,3'-二羟基-5'-甲氧基异黄酮

金龟子绿僵苦参E

毛头鬼伞 cis-宫部苔草C
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)