p110δ抑制剂(CAL-101)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10365

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：p110δ抑制剂(CAL-101)

英文名称：CAL-101

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

货号：FS-X10365

产品介绍:

英文名称：CAL-101

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

CAL-101是一种有效的选择性的p110δ抑制剂，IC50为2.5nM，比作用于其他I类PI3K酶(抑制p110α，p110β和p110γ;IC50分别为820，565和89nM)选择性高40到300倍。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：870281-82-6

别名：GS-1101;Idelalisib

纯度：98.38%

分子量：415.42

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

黄曲霉*丝/苏蛋白激NEK8抗体Human LTB4R(Leukotriene B4 receptor 1) 人抗BP180抗体(anti-BP180-Ab)

*灰葡萄孢核孔蛋白Nup37抗体Human AGRP(Agouti-related protein) 人抗BB抗体(BB-Ab)

漫游孢囊菌属核结构蛋白5抗体Human GHSR(Growth hormone secretagogue receptor type 1) 军团菌抗原(LP Ag)

枯草芽孢杆菌 B核结合蛋白1抗体Human PPY(Pancreatic prohormone) 军团菌抗体IgM(LP Ab-IgM)

稻麦穗孢霉核结合蛋白2抗体Human SERPINA3(Alpha-1-antichymotrypsin) 军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)

无花果曲霉乙酰基转移10抗体Human APOE(Apolipoprotein E) 军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)

芹侧耳（杏鲍菇）丝/苏蛋白激Nek7抗体Human AGT(Angiotensinogen) 卷曲蛋白8(FZD8)

传染性法氏囊病病神经正五聚体1抗体Human CTNNβ1(Catenin beta-1) 聚集蛋白(Agrin)

金太阳杏叶细菌性穿孔病烟酰核转氢抗体Human SERPINA3(Alpha-1-antichymotrypsin) 巨噬移动因子(MIF)

青灰红菇利钠肽受体B抗体Human AGT(Angiotensinogen) 巨噬移动抑制因子(MIF)

金黄壳囊孢菌利钠肽受体C抗体Human CTNNβ1(Catenin beta-1) 巨噬炎性蛋白5(MIP-5)

大肠埃希氏菌磷化谷受体2B抗体Human APOE(Apolipoprotein E) 巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)

木糖葡萄球菌磷化谷受体2B抗体Human HIF1A(Hypoxia-inducible factor 1-alpha) 巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)

木霉NADPH氧化2抗体Human MAP2K5(Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 5) 巨噬炎性蛋白2(MIP-2)

构巢曲霉NADPH氧化活化蛋白1抗体Human IAPP(Islet amyloid polypeptide) 巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)

孢小克银汉霉轮生变种磷化核因子抗体Human NOS3/eNOS(Nitric oxide synthase, endothelial) 巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)

绿色木霉=木木霉Trichoderma│viride 质量规格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg槲皮

链霉菌Streptomyces│sp. 质量规格：≥500IU/mg,BR,牛源提取槲皮

链霉菌Streptomyces│sp. 质量规格：≥3TIU/mg,进分,来源: 牛肺或牛胰花旗松；二氢槲皮
p110δ抑制剂(CAL-101)蛾微杆 BOC-D-4-嗜性粒阳离子蛋白

假土曲霉 D-葡萄糖二-1,4-内酯一水受体TNFRSF结合丝苏激1

里亚氏须腹双(频哪合)二受体酪激

美澳型核果褐腐病 2-氨基-5-氟苯受体相互作用蛋白1

酿酒酵母 3-氨基-5-羟基吡唑瘦

淡紫拟青霉 N-(2-羧苯基)甘瘦受体

球形芽孢杆 2-硝基肉桂双氢睾酮

哈茨木霉 2-水通道蛋白1

镰刀属 3,5-双（三氟甲基）苯水通道蛋白2

枯草芽孢杆奎宁盐盐二水合物水通道蛋白3

蜡状芽孢杆 4-喹啉水通道蛋白4

露湿拟漆斑 2-乙苯水通道蛋白5

黄多孔 2,4-二溴死亡受体5

龟裂链霉龟裂亚种 2,5-二溴四氢生物蝶呤

少根根霉戴尔变种 8-溴-2-甲基喹啉松弛肽;松弛
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)