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货号 | FS-X10246 |
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产品介绍:
英文名称: 产品规格:2mg PD98059是一种非ATP 竞争性的MEK 抑制剂,IC50为2 μM,特异性抑制MEK-1介导的MAPK 激活;不直接抑制ERK1或ERK2。 |
中文名称:PD 98,059(MAPKK抑制剂)
英文名称:
产品规格:2mg
货号:FS-X10246
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
香栓菌Hib乙酰水解抗体Human MUC20(Mucin-20) 大鼠Bκ轻肽基因增强子核因子抑制因子α(NFKBIA)免疫试剂盒
少根根霉原变种肿瘤异常甲基化蛋白1抗体Human SKAP2 大鼠Bκ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫试剂盒
芽孢杆菌肿瘤异常甲基化蛋白2抗体Human SIGMAR1 大鼠B-淋巴趋化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌缺氧诱导因子脯酰羟化4抗体Human SIL1 大鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)免疫试剂盒
少根根霉人内源性逆转录病膜糖蛋白2抗体Human SIKE1 大鼠Bcl-2样蛋白1(Bcl2-L-1/Bcl-X)免疫试剂盒
虫草Beta基己糖beta亚基蛋白B链抗体Human SHOX 大鼠ATP1B4蛋白(ATP1B4)免疫试剂盒
黄曲霉HEXIM2蛋白抗体Human SIM2 大鼠Apelin(APLN)免疫试剂盒
松果链霉菌3'-5'外切1蛋白抗体Human SHMT2 大鼠apelin 13(AP13)免疫试剂盒
黑马朗假丝酵母型肝炎病NS5B抗体Human SHROOM1 大鼠apelin 12(AP12)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌缺氧诱导基因1C蛋白抗体Human SH3GL3 大鼠Agouti相关蛋白(AGRP)免疫试剂盒
间型假丝酵母HEG同源蛋白1抗体Human MUC20(Mucin-20) 大鼠ADM2(ADM2)免疫试剂盒
雷丸菌人肿瘤抑制蛋白抗体Human SHANK1 大鼠8异前列腺F2α(8-iso-PGF2a)免疫试剂盒
苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种Hemk甲基转移家族1号蛋白抗体Human SH3GL2 大鼠8异前列腺(8-iso-PG)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌Hemk甲基转移家族2号蛋白抗体Human SH3PXD2A 大鼠8-异构前列腺F2α(8-epi-PGF2α)免疫试剂盒
石楠炭疽病菌HEN1甲基转移同源蛋白1抗体Human SHARPIN(Sharpin) 大鼠8羟基脱氧鸟(8-OHdG)免疫试剂盒
白假丝酵母缺氧诱导基因2蛋白抗体Human SHD 大鼠Ⅵ型胶原(Col Ⅵ)免疫试剂盒
产碱假单胞菌Pseudomonas│alcaligenes 质量规格:分析标准品,98.5%原花青B2
沃氏富盐菌Haloferax│volcanii 质量规格:分析标准品,99%泽泻B醋酯
谷棒杆菌Corynebacterium│glutamicum 质量规格:10μg/ml,u=6%肉豆蔻木脂
PD 98,059(MAPKK抑制剂)褐孢大秃马勃 3-氨基-2,6-二氟甲酯分泌型球蛋白E
微小杆 3--4-三氟甲基苄草酰乙
香菇 N-羟基叔丁酯β-防御2
链霉 6-甲甲酯生物
矮小伞枝霉 3--2-羧甲酯球蛋白EFc段受体I
大肠埃希 1,4-苯二乙二乙酯甘油三脂
单梗头孢霉属 甲基谷胎球蛋白B
毛尖蘑 cortienic acid乙脑特异性抗体
Virgibacillus 3-基-4-孔肯尼亚病抗体
绿色木霉 7--1H-吡咯并[3,2-b]吡啶蛋白激A
枯草芽孢杆 水杨基荧光酮诺如病
简单青霉 4--6,7-二甲氧基喹啉胱硫分解
酿酒酵母 八氟戊GRO;KC
酿酒酵母 全氟己烷β-羟丁
枯草芽孢杆 五氟血管紧张Ⅱ受体1
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