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CDK广谱抑制剂

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所  在  地上海市

更新时间:2022-05-23 14:15:11浏览次数:144次

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货号 FS-X10773
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中文名称:CDK广谱抑制剂

英文名称:Flavopiridol Hydrochloride

产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

货号:FS-X10773

产品介绍:

Flavopiridol Hydrochloride是一种CDK的广谱抑制剂,与ATP竞争性地抑制CDK1,CDK2和CDK4的活性,IC50值分别为30,170,100nM。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

号:131740-09-5

别名:HL 275;NSC 649890;MDL 107826A;FLAVOPIRIDOL HCL;Alvocidib Hydrochloride

纯度:98.95%

分子量:438.3

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

培养操作步骤:

1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

柴油食烷菌(亲和纯化) 牛IgGAnti-ISL2 Antibody人抗型肝炎病抗体(anti-HCV)

细丽外担菌荧光标记牛血清白蛋白Anti-ITGA2 Antibody人抗型肝炎病抗体(anti-HCV)

核盘菌罗丹明标记牛血清白蛋白Anti-ITPKA Antibody人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)

Phaeobotryon罗丹明标记狗IgMAnti-ITGAD Antibody人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)

Microbacterium halotolerans荧光Cy3标记狗IgMAnti-ITIH2 Antibody人单核增多性李斯特菌O((LLO)

酿酒酵母荧光PE标记狗IgGAnti-ITPK1 Antibody人单核增多性李斯特菌O((LLO)

黑曲霉兔抗荧光Anti-ITPKC Antibody人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)

巧克力糖霉菌羊IgGAnti-JAK2 Antibody人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)

黄曲霉辣根过氧化物标记羊抗人IgAAnti-ITPKB Antibody人腺相关病(AAV)

冠突曲霉荧光APC标记羊IgG(流式同型对照)Anti-JAK1 Antibody人腺相关病(AAV)

鞘单胞菌(加词待译)罗丹明标记Anti-JAK2 Antibody人乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)

无花果曲霉(免疫亲和纯化)人IgMAnti-JAKMIP2 Antibody人乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)

枯草芽孢杆菌兔抗HRPAnti-JAK3 Antibody人伤寒抗原(St-Ag)

秀珍菇(亲和纯化) 人IgGAnti-JAK2 Antibody人伤寒抗原(St-Ag)

短小芽孢杆菌(亲和纯化) 人分泌型IgAAnti-JAM A pY280 Antibody人类嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)

酿酒酵母生物化人IgGAnti-JMJD5 Antibody 人类嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)

环指蛋白40抗体匍匐放射毛霉或雅致放射毛霉HCMEC人心脏微血管内皮细胞

环指蛋白8抗体李克犁头霉(伞枝梨头霉)人急性早幼粒白血病细胞

细胞衰老抑制基因蛋白抗体皮状丝孢酵母大鼠垂体瘤细胞

中间丝相关蛋白抗体贝雷丝孢酵母人急性髓细胞性白血病细胞
CDK广谱抑制剂肉色栓 半固体营养琼脂低氧诱导因子-1α

拟茎点霉属 麦芽汁培养基对氧磷1

冬虫夏草 双料乳糖胆盐发酵培养基多巴

莓实假单胞 远藤氏琼脂二氧化

猪丹丝 月桂基硫盐蛋白胨肉汤-MUG肥大类胰蛋白

松杉灵芝 MFC肉汤肺表面活性物质相关蛋白A

枯草芽孢杆 马铃薯琼脂培养基肺表面活性物质相关蛋白B

根瘤 马铃薯葡萄糖水肺表面活性物质相关蛋白C

松鼠葡萄球 综合马铃薯培养基肺表面活性物质相关蛋白D

曲霉 胰酪胨大豆多粘肉汤基础分泌型球蛋白A

绿色木霉 沙氏葡萄糖液体培养基(SDB)钙蛋白

草假单胞 CIN培养基钙调磷调节蛋白1

黑曲霉 波尔顿选择性肉汤甘油三酯

猫埃菲比体 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基肝化血浆总脂解

德尔布有孢酵母 乳糖蛋白胨培养液肝结合性表皮生长因子

 


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