MEK变构抑制剂(TAK-733)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X11008

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：MEK变构抑制剂(TAK-733)

英文名称：TAK-733

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

货号：FS-X11008

产品介绍:

TAK-733是MEK变构抑制剂，对MEK1的IC50为3.2nM，而对Abl1，AKT3，c-RAF，CamK1，CDK2和c-Met则无活性。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：1035555-63-5

纯度：99.74%

分子量：504.23

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

豇豆慢生根瘤菌Pseudomonas aeruginosa大鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)

花楸盘多毛孢Pseudomonas aeruginosa大鼠抗平滑肌抗体(ASMA)

灵芝(红芝，赤芝)Pseudomonas aeruginosa大鼠抗平滑肌抗体(ASMA)

氏针层孔菌Pseudomonas aeruginosa大鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)

酿酒酵母Pseudomonas aeruginosa大鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)

肠沙门氏菌肠亚种迈阿密血清型Pseudomonas aeruginosa大鼠纤溶抑制因子/凝血激活的纤溶抑制物(TAFI)

产红青霉Pseudomonas aeruginosa大鼠纤溶抑制因子/凝血激活的纤溶抑制物(TAFI)

基简马杜拉放线菌Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)

尿肠球菌Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)

褐红小孔菌Pseudomonas aeruginosa大鼠游离脂肪(FFA)

苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种Pseudomonas aeruginosa大鼠游离脂肪(FFA)

平菇Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板反应蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)

托姆青霉Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板反应蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)

豌豆根瘤菌Pseudomonas aeruginosa大鼠骨粘连蛋白(ON)

黑曲霉Pseudomonas aeruginosa大鼠骨粘连蛋白(ON)

玉乳杆菌Pseudomonas aeruginosa大鼠叶(FA)

P2Y1受体抗体/受体抗体极细链格孢人诱导型多能干细胞（iPS细胞）DYR00（干细胞库保藏）

腺环化激活肽-38抗体裂拟迷孔菌大鼠骨髓MSC间充质干细胞（干细胞库保藏）

蛋白活化受体4抗体外皮毛霉小鼠胚胎肌母细胞（2014年新引进）（未分化，可诱导分化形成肌纤维）（干细胞库保藏）

p21激活激4抗体星形拟盘多毛孢人类胚胎干细胞H1（干细胞库保藏）
MEK变构抑制剂(TAK-733)巨大芽孢杆 β-巯基乙盐盐

蜂蜜曲霉喹啉黄

Penicillium 8-氮鸟

海泥黄杆草甘二磷

蜡状芽孢杆异丹C

链球(不定种) 调环钙

酿酒酵母丹A甲酯

枯草芽孢杆 3-羟基-5-甲基异恶唑

型副伤门氏地肤子皂Iia

云南掷孢酵母噻苯咪唑

酿酒酵母地肤子皂II

根癌农杆GV31 D-(+)-苹果

桔青霉竹节参皂V甲酯

猪瘟病甘油三酯

树舌灵芝白花前胡香豆精III
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)